《分子生物学》课程教学课件（讲稿）第八章 分子生物学技术（分子生物学技术）

第九章分子生物学研究方法（1）一、重组DNA技术发展史二、基因工程（重组DNA技术）主要操作

第九章 分子生物学研究方法（1） 一 、重组DNA技术发展史 二、基因工程（重组DNA技术）主要操作

重组DNA技术发展史重组DNA技术诞生的理论基础40年代：遗传的物质基础是DNA50年代：DNA分子的双螺旋结构模型和半保留复制。：“中心法则”、操纵子学说、50年代末和60年代：遗传密码成功破译，70年代初：重组DNA技术

一、 重组DNA技术发展史 § 40年代：遗传的物质基础是DNA § 50年代：DNA 分子的双螺旋结构模型和半保留复 制。 § 50年代末和60年代： “中心法则” 、操纵子学说、 遗传密码成功破译。 § 70年代初：重组DNA技术 重组DNA技术诞生的理论基础

重组DNA技术（基因工程）的概念重组DNA技术（recombinant DNA technique）：是按照人们意愿，在体外对DNA分子进行重组再将重组分子导入受体细胞，使其在细胞中扩增和繁殖，以获得该DNA的大量拷贝。基因克隆(gene cloning)分子克隆(molecular cloning)

§ 重组DNA技术(recombinant DNA technique): 是按照人们意愿，在体外对DNA分子进行重组, 再将重组分子导入受体细胞，使其在细胞中扩增 和繁殖，以获得该DNA的大量拷贝。 § 基因克隆(gene cloning) § 分子克隆(molecular cloning) 重组DNA技术（基因工程）的概念

重组DNA技术的基本步骤1、四大要素①外源基因②载体③工具酶④受体细胞

重组DNA技术的基本步骤 1、四大要素 ①外源基因 ②载体 ③工具酶 ④受体细胞

2、重组DNA技术的基本步骤分离目的基因)切（割目的基因和载体）纵间体系接（连目的基因和载体）转（化宿主细胞筛（选阳性克隆）表（达目的基因）

2、重组DNA技术的基本步骤

O以质粒为载体的载体外源重组DNA分子DNA转化或转染细菌重组DNA增殖888细菌在培养液DNA中素殖后，在固克隆过程体培养基生长筛选含重组质粒的细菌

以 质 粒 为 载 体 的 DNA 克 隆 过 程

目的基因的来源■天然DNA(染色体DNA、病毒DNA、噬菌体DNA、原核细胞质粒DNA、线粒体真核细胞：cDNA或gDNA文库DNA和叶绿体DNA）丨人工合成DNAPCR扩增目的基因

目的基因的来源 n 天然DNA 原核细胞 真核细胞：cDNA或gDNA文库 n 人工合成DNA PCR扩增目的基因 （染色体DNA、病毒 DNA、噬菌体DNA、 质粒DNA、线粒体 DNA和叶绿体DNA）

基因工程为什么需要载体？载体的基本条件1. 能自主复制；2.具有两个以上的遗传标记物，便于重组体的筛选和鉴定；3.有克隆位点（（外源DNA插入点），常具有多个单一酶切位点，称为多克隆位点（MCS）；4.分子量小，以容纳较大的外源DNA

载体的基本条件 1.能自主复制； 2.具有两个以上的遗传标记物，便于重组体的筛选 和鉴定； 3.有克隆位点（外源DNA插入点），常具有多个单一 酶切位点，称为多克隆位点（MCS）； 4.分子量小，以容纳较大的外源DNA。 基因工程为什么需要载体？

多克隆位点MCSAmp复制起始点遗传标记ori基因载体

MCS

克隆载体（cloningvector）可携带插入的月的DNA进入宿主细胞内并能自我复制的DNA分子。表达载体（expressionvector）在克隆载体基本骨架的基础上增加表达元件（如启动子、RBS、终止子等）：使自的基因能够表达的载体

克隆载体(cloning vector) 可携带插入的目的DNA进入宿主细胞内并能自 我复制的DNA分子。 表达载体(expression vector) 在克隆载体基本骨架的基础上增加表达元件 （如启动子、RBS、终止子等），使目的基因能够 表达的载体