《分子生物学》课程教学资源（PPT课件）第二章 DNA变性与复性

DNA变性与复性

DNA变性与复性

核酸的变性 chapter】

DNA变性(DNA melting/denaturation) 核酸在理化因素的影响下，维持 双螺旋结构的作用力受到破坏， 双螺旋DNA 稳定的双螺旋结构松散为无规则 的单链结构。 变性DNA 不涉及核苷酸链中共价键的断裂

核酸在理化因素的影响下，维持 双螺旋结构的作用力受到破坏， 稳定的双螺旋结构松散为无规则 的单链结构。 DNA变性（DNA melting/denaturation） 不涉及核苷酸链中共价键的断裂

影响变性的因素 加热，高H,有机试剂（尿素、甲酰胺)，低离子强度等。 增色效应 DNA发生变性时溶液的光吸收值在260nm处会显著增强，这 种现象称为增色效应

加热，高pH，有机试剂（ 尿素、 甲酰胺 )，低离子强度等。 影响变性的因素 DNA发生变性时溶液的光吸收值在260nm处会显著增强，这 种现象称为增色效应。 增色效应

熔解曲线与Tm值 通过检测DNA溶液紫外吸收率 可以监控DNA的变性过程。典 12 单链 型的DNA熔解曲线呈S型。 熔解 核酸加热变性过程中，紫外光吸收 1.0 Tm=85.0℃ 值达到最大值的50%时所对应的温 双链 度称为核酸的解链温度，又称熔解 温度(Tm)。 0.8 72 76 80 84 88 92 96 温度/℃

通过检测DNA溶液紫外吸收率 可以监控DNA的变性过程。典 型的DNA熔解曲线呈S型。 熔解曲线与Tm值 核酸加热变性过程中，紫外光吸收 值达到最大值的50%时所对应的温 度称为核酸的解链温度，又称熔解 温度（Tm）

影响Tm值的因素 1006 GC碱基对含量：GC含量越高Tm 80日 值越大。Tm=69.3+0.41(G 60 40日 离子强度：溶液中盐离子浓x, 20 Tm值就越高。 60 70 80 90 100 110 T./℃

影响Tm值的因素 GC碱基对含量：GC含量越高，Tm 值越大。Tm = 69.3 + 0.41(G+C)% 离子强度：溶液中盐离子浓度越高， Tm值就越高

核酸的纯度及浓度检测 >利用核酸在260nm处的光吸收测定浓度。1mgml双链DNA 的OD260=20,所以当OD260=1时，双链DNA的浓度为 50μg/ml。1mg/ml RNA或单链DNA的OD26o=25,故 OD260=1时，浓度为40μg/ml。 >OD260/OD280可用于测定DNA纯度。dsDNA的 OD260/OD280约为1.8，纯RNA约为2.0，蛋白质小于1 (大概只有0.5)。OD260/OD280>1.8可能有RNA污染， <1.8可能有蛋白污染

核酸的纯度及浓度检测 ➢ 利用核酸在260nm处的光吸收测定浓度。1mg/ml双链DNA 的OD260=20，所以当OD260=1时，双链DNA的浓度为 50µg/ml。1mg/ml RNA或单链DNA的OD260=25，故 OD260=1时，浓度为40µg/ml。 ➢ OD260/OD280可用于测定DNA纯度。 dsDNA的 OD260/OD280 约为1.8， 纯RNA约为2.0，蛋白质小于1 （大概只有0.5）。OD260/OD280＞1.8可能有RNA污染， ＜1.8 可能有蛋白污染

核酸的复性 hptc】

DNA复性(DNA annea/renaturation) 变性DNA在适当条件下，恢复形成双螺旋结构的现象，称为 复性。是变性的一种逆转过程。 Denaturation▲ DS DNA SS DNA Renaturation

DNA复性（DNA anneal/renaturation） 变性DNA在适当条件下，恢复形成双螺旋结构的现象，称为 复性。是变性的一种逆转过程。 DS DNA SS DNA Denaturation ▲ ▼ Renaturation

DNA复性(DNA anneal/renaturation) 热变性DNA经缓慢冷却后，可以复性，称为退火。 5 3 Backbone Denaturation Heating Slow cooling Renaturation Double strand Single strands B.DNA (B oonformation)

DNA复性（DNA anneal/renaturation） 热变性DNA经缓慢冷却后，可以复性，称为退火