《分子生物学》课程教学课件（PPT讲稿）第八章 分子生物学技术

分子生物学实验基本原理

分子生物学实验基本原理

重组DNA的基本过程 DNA获得(PCR和质粒提取) ·酶切（限制性核酸内切酶） 。 连接(DNA连接酶) ·热激转化（大肠杆菌感受态制备) ·阳性克隆筛选(PCR) ·蛋白表达(SDS-PAGE)

重组DNA的基本过程 • DNA获得（PCR和质粒提取） • 酶切（限制性核酸内切酶） • 连接（DNA连接酶） • 热激转化（大肠杆菌感受态制备） • 阳性克隆筛选（PCR） • 蛋白表达（SDS-PAGE）

基因组DNA 载体 I 酶切割 酶切割 nyTO4 Iū 粘末端连接法 DNA连接酶 重组载体 导入受体细胞

载体 基因组DNA 重组载体 酶切割 酶切割 DNA连接酶 导入受体细胞 粘 末 端 连 接 法

酒 genomic DNA vector restriction endonuclease m皿

vector restriction endonuclease genomic DNA

o genomic DNA vector restriction endonuclease mml ligase host

ligase vector restriction endonuclease genomic DNA host

限制性内切酶 ·原核中，识别DNA特定序列（回文序列）， 切割DNA双链 ·粘末端和平末端 ·限制性内切酶作用机制

限制性内切酶 • 原核中，识别DNA特定序列（回文序列）， 切割DNA双链 • 粘末端和平末端 • 限制性内切酶作用机制

DNA连接酶 ·连接相邻DNA的5P和3OH 。 DNA连接酶并不能连接两条单链DNA分子 或环化单链DNA分子，被连接的DNA链必 须是双螺旋的一部分。 DNA连接酶作用机制

DNA连接酶 • 连接相邻DNA的5’P和3’OH • DNA连接酶并不能连接两条单链DNA分子 或环化单链DNA分子，被连接的DNA链必 须是双螺旋的一部分。 • DNA连接酶作用机制

质粒 ·细菌中另一类遗传物质，染色体之外 。j 双链闭合环状DNA,自我复制 ·含有抗生素抗性基因 ·碱裂解法提取质粒 ·利用质粒和染色体DNA变性和复性的差异

质粒 • 细菌中另一类遗传物质，染色体之外 • 双链闭合环状DNA，自我复制 • 含有抗生素抗性基因 • 碱裂解法提取质粒 • 利用质粒和染色体DNA变性和复性的差异

Nucleoid Plasmids Plasmids are small circular DNA molecules that are found inside some prokaryotic cells

EcoRI Clal HindIll EcoRV Sspl Nhel BamHI Banl Xmnl Banl HincIⅡ SphI Scal SalL,Accl,HindΠ Amp' Tet' Ppal. .XmalⅡ -Nrul BspMI pBR322 (4363bp) Bsml Styl Aval Ball BspMII Ndel AccI.Snal TthlliI