中国农业大学：《发酵工程》课程教学资源（PPT课件）第二章 工业微生物菌种的选育与保藏 第二节 菌种选育与保藏

基因重组 ·转化 ·转导 ·接合 ·原生质体融合

基因重组 • 转化 • 转导 • 接合 • 原生质体融合

接合 E.coli S17-1 pCJY08 682kb -Spe EcoRI R.eutropha PHB-4

E. coli S17-1 R. eutropha PHB-4 接 合 K m r mo b rep P lac HindIII phaC2P s SpeI EcoRI pCJY08 6.82kb

原生质体融合 ·概念：通过人为方法，使遗传性状不同的两细胞的 原生质体发生融合，并进而发生遗传重组以产生同 时带有双亲性状的遗传性稳定的融合子的过程，称 为原生质体融合。 ·适用范围：各种生物细胞都能进行原生质体融合， 包括各种原核生物、真核微生物以及高等动植物和 人体的不同细胞

原生质体融合 •概念：通过人为方法，使遗传性状不同的两细胞的 原生质体发生融合，并进而发生遗传重组以产生同 时带有双亲性状的遗传性稳定的融合子的过程，称 为原生质体融合。 •适用范围：各种生物细胞都能进行原生质体融合， 包括各种原核生物、真核微生物以及高等动植物和 人体的不同细胞

原生质体融合 ·选择亲株→→制备原生质体一→原生质体融合→ 原生质体再生→→ 筛选优良性状的融合重组子 去壁 (高渗下) [AB-] [A'B- PEC或电脉冲 稀释，涂但 离心，促融 使细呢赔再生 8 去壁 (高添下) (高渗下) [A-B'] [A-B' 各种脸合子 亲株细图 原生质体 各种融合子影印接种检山[入'B】 饰选优良性状 长成菌落 【-] 融合子 的险合子 图836 原牛质体融合操作示意图

原生质体融合 •选择亲株→ →制备原生质体→→原生质体融合 → → 原生质体 再生 → → 筛选优良性状的融合重组子

原生质体融合 ·利用营养缺陷型作为遗传标记选择融合 子 ·利用抗药性作为遗传标记选择融合子 ·单亲灭活 ·荧光染色

原生质体融合 •利用营养缺陷型作为遗传标记选择融合 子 •利用抗药性作为遗传标记选择融合子 •单亲灭活 •荧光染色 •

基因工程育种 1.目的基因的分离 2.载体选择 3.目的基因与载体DNA的体外重组 4.转化 5.筛选

基因工程育种 1. 目的基因的分离 2. 载体选择 3. 目的基因与载体DNA的体外重组 4. 转化 5. 筛选

Foreign DNA gene for region of interest antibiotic Plasmid EcoRI resistance EcoRI EcoRI EcoRI EcoRI Sticky ends" Hybridization +DNA ligase Recombinant DNA DNA insertion 。 Bacteria Bacterial Bacteria platted on medium cell chromosome antibiotic Cloning ©o Only bacteria containing recombinant DNA grow ①固⊙o Culture I Clone DNA purification 8 Cloning into a plasmid

工业微生物菌种保藏技术

发酵工程 工业微生物菌种保藏技术

微生物菌种保藏 。目的： 不死亡、不变异、不污染杂菌 ·基本方法： 低温、干燥、缺氧、低营养

•目的： 不死亡、不变异、不污染杂菌 •基本方法： 低温、干燥、缺氧、低营养 微生物菌种保藏

Preservation ·固体斜面保藏法 ·液体石蜡保藏法 ·真空冷冻干燥保藏 法 ·砂土管 ●●●●

Preservation •固体斜面保藏法 •液体石蜡保藏法 •真空冷冻干燥保藏 法 •砂土管 •