中国农业大学：《发酵工程》课程教学资源（讲义）实验四 流加发酵动力学实验

实验三流加发酵动力学实验 实验老师准备： 1、种子培养基（实验老师准备4个100ml种子） 2、产酶培养基确定（实验老师准备15瓶100ml产酶培养基和200ml己经长好 的种子)，培养基的组成按上次实验配方设计。 一，实验目的 在分批发酵工艺的基础上，进行不同营养物质在不同时间和不同浓度的添 加，观察菌体生长和产物形成及菌种代谢之间的关系，以获得最佳的发酵代谢调 控方式。 二.仪器 发酵罐（最大转速250rmin),紫外分光光度计、电热恒温水浴槽、烘箱 电子天平（感量0.001g) 三.试剂和测定方法 1、DNS试剂：取6.3g3,5-二硝基水杨酸(DNS)和262mL2mol/LNaOH溶液 加到酒石酸钾钠的热溶液中(192g酒石酸钾钠溶于500mL水中)，再加5g重蒸酚 和5g亚硫酸钠，搅拌使其溶解，冷却后加水定容至1000mL,保存于棕色瓶中放 置7天后使用 2、测定蛋白酶、生物量、还原糖、蛋白酶活、H的方法同前次实验 四、实验具体操作 实验分组：每班分成五组，分别在以下时间进行取样，每组上5L发酵罐1次， 不同组所采取的流加模式不同，最终将五组结果进行汇总，观察不同流加模式对 目标产物的影响。 具体操作方案： (1)培养基的配制：培养基的配方按优化出最适的培养基组成进行配制， 葡萄糖的初始浓度控制在1%

实验三 流加发酵动力学实验 实验老师准备： 1、种子培养基（实验老师准备 4 个 100ml 种子） 2、产酶培养基确定（实验老师准备 15 瓶 100ml 产酶培养基和 200ml 已经长好 的种子），培养基的组成按上次实验配方设计。 一．实验目的 在分批发酵工艺的基础上，进行不同营养物质在不同时间和不同浓度的添 加，观察菌体生长和产物形成及菌种代谢之间的关系，以获得最佳的发酵代谢调 控方式。 二．仪器 发酵罐（最大转速250r/min），紫外分光光度计、电热恒温水浴槽、烘箱 电子天平（感量0.001g） 三．试剂和测定方法 1、DNS试剂：取6.3g3,5-二硝基水杨酸（DNS）和262mL2mol/LNaOH溶液 加到酒石酸钾钠的热溶液中（192g酒石酸钾钠溶于500 mL水中），再加5g重蒸酚 和5g亚硫酸钠，搅拌使其溶解，冷却后加水定容至1000mL，保存于棕色瓶中放 置7天后使用。 2、测定蛋白酶、生物量、还原糖、蛋白酶活、pH的方法同前次实验 四、实验具体操作 实验分组：每班分成五组，分别在以下时间进行取样，每组上5L发酵罐1次， 不同组所采取的流加模式不同，最终将五组结果进行汇总，观察不同流加模式对 目标产物的影响。 具体操作方案： （1） 培养基的配制：培养基的配方按优化出最适的培养基组成进行配制， 葡萄糖的初始浓度控制在1％

(2)培养基和罐及附属配件的灭菌：将培养基装入发酵罐中，注意留出流 加的空间（装液量为罐体的50%），并联入流加瓶，包扎后，放入高 压灭菌锅，121℃，20min灭菌。冷却后安装在发酵罐上。 (3)培养：按接种量的10%，在28℃、250r/min的条件下培养15h. 在不同的培养时间进行流加营养基质，具体流加模式为：发酵培养开始2 后，开始流加葡萄糖，补糖量50.0gL,持续时间分别为2h、4h、6h、8h、10h 后再培养至总培养时间15h,每隔3h取样，测定发酵液中还原糖含量和蛋白酶活， 绘制补料条件下的发酵结果，并对比整个班级结果，分析与其它组相比，本组所 采取的流加模式的优缺点

（2） 培养基和罐及附属配件的灭菌：将培养基装入发酵罐中，注意留出流 加的空间（装液量为罐体的50％），并联入流加瓶，包扎后，放入高 压灭菌锅，121℃，20min灭菌。冷却后安装在发酵罐上。 （3） 培养：按接种量的10％，在28℃、250r/min的条件下培养15h. 在不同的培养时间进行流加营养基质，具体流加模式为：发酵培养开始2h 后，开始流加葡萄糖，补糖量50.0 g/L，持续时间分别为2 h、4h、6h、8h、10h 后再培养至总培养时间15h，每隔3h取样，测定发酵液中还原糖含量和蛋白酶活， 绘制补料条件下的发酵结果，并对比整个班级结果，分析与其它组相比，本组所 采取的流加模式的优缺点