厦门大学：《现代生物实验学》课程教学课件（PPT讲稿）lab-1中和剂的选择

实验一 中和剂的选择 一 教学要求 了解中和剂的作用、类型及选择方法。 二 实验原理 某些有机或无机化合物与消毒剂作用后不仅能及时 终止消毒剂的杀灭微生物作用，且这些化合物本身及其 与消毒剂的反应产物对微生物无抑制或杀灭作用，对培 养基亦无不良影响。在进行消毒实验时，这些化合物可 作为中和剂用来终止消毒剂杀菌作用，以便能准确获得 消毒剂在一定时间内的杀菌结果。 某一种消毒剂要用什么化合物中和，需要经过实验 选择。 实验时，将拟选择的中和剂样品加入测定管（该 管含消毒剂和指示菌并已作用一定时间）中，经充分中 和作用后，取样测定含菌数，测定结果与对照组的测定 结果进行比较后，即可确定那种试剂可用作该消毒剂的 中和剂

实验一 中和剂的选择 一 教学要求 了解中和剂的作用、类型及选择方法。 二 实验原理 某些有机或无机化合物与消毒剂作用后不仅能及时 终止消毒剂的杀灭微生物作用，且这些化合物本身及其 与消毒剂的反应产物对微生物无抑制或杀灭作用，对培 养基亦无不良影响。在进行消毒实验时，这些化合物可 作为中和剂用来终止消毒剂杀菌作用，以便能准确获得 消毒剂在一定时间内的杀菌结果。 某一种消毒剂要用什么化合物中和，需要经过实验 选择。 实验时，将拟选择的中和剂样品加入测定管（该 管含消毒剂和指示菌并已作用一定时间）中，经充分中 和作用后，取样测定含菌数，测定结果与对照组的测定 结果进行比较后，即可确定那种试剂可用作该消毒剂的 中和剂

三 实验材料与器材 ⚫ 器材：恒温培养箱，菌落计数器，电热 恒温水浴锅，平皿（直径9cm）、锥形烧 瓶、量筒、无菌刻度吸管（1.0，5.0， 10.0mL）。 ⚫ 指示菌：大肠杆菌（8099或ATCC 25922），枯草杆菌黑色变种（ATCC 9372）芽胞

三 实验材料与器材 ⚫ 器材：恒温培养箱，菌落计数器，电热 恒温水浴锅，平皿（直径9cm）、锥形烧 瓶、量筒、无菌刻度吸管（1.0，5.0， 10.0mL）。 ⚫ 指示菌：大肠杆菌（8099或ATCC 25922），枯草杆菌黑色变种（ATCC 9372）芽胞

四 实验步骤 ⚫ 1、大肠杆菌菌悬液的制备 ⚫ 经活化过的大肠杆菌菌种转接于营养琼脂培养基斜面，37℃下培养24h。 ⚫ 加入5mL 无菌PBS洗下菌苔。 ⚫ 用无菌脱脂棉过滤。 ⚫ 经过滤的菌液用PBS稀释成含菌量为5×105~5×106cfu/mL的菌悬液。 ⚫ 2、芽胞悬液的制备 ⚫ 经活化过的枯草杆菌黑色变种菌种转接于营养琼脂培养基斜面，37℃下培养 3~5d，取出室温下放置5~7d，以促使其芽胞形成（要求芽胞数达90%以上）。 ⚫ 用适量的PBS洗下菌苔，菌苔液置旋涡混合器上振荡1~2 min。 ⚫ 用无菌脱脂棉过滤。 ⚫ 将过滤液离心（3000r/min）10 min，沉淀用PBS洗涤3次。 ⚫ 用PBS制成适当浓度的芽胞悬液。 ⚫ 芽胞悬液置于45℃水浴中保温24h后，取出，放入80℃水浴中加热10 min（或 60℃，30 min），杀死未形成芽胞的菌体。 ⚫ 将经过处理的芽胞悬液离心（3000r/min）10 min，沉淀（芽胞）再用PBS稀释 成含菌量为5×105~5×106cfu/mL的芽胞悬液。 ⚫ 2、测定 ⚫ 分4组进行测定：

四 实验步骤 ⚫ 1、大肠杆菌菌悬液的制备 ⚫ 经活化过的大肠杆菌菌种转接于营养琼脂培养基斜面，37℃下培养24h。 ⚫ 加入5mL 无菌PBS洗下菌苔。 ⚫ 用无菌脱脂棉过滤。 ⚫ 经过滤的菌液用PBS稀释成含菌量为5×105~5×106cfu/mL的菌悬液。 ⚫ 2、芽胞悬液的制备 ⚫ 经活化过的枯草杆菌黑色变种菌种转接于营养琼脂培养基斜面，37℃下培养 3~5d，取出室温下放置5~7d，以促使其芽胞形成（要求芽胞数达90%以上）。 ⚫ 用适量的PBS洗下菌苔，菌苔液置旋涡混合器上振荡1~2 min。 ⚫ 用无菌脱脂棉过滤。 ⚫ 将过滤液离心（3000r/min）10 min，沉淀用PBS洗涤3次。 ⚫ 用PBS制成适当浓度的芽胞悬液。 ⚫ 芽胞悬液置于45℃水浴中保温24h后，取出，放入80℃水浴中加热10 min（或 60℃，30 min），杀死未形成芽胞的菌体。 ⚫ 将经过处理的芽胞悬液离心（3000r/min）10 min，沉淀（芽胞）再用PBS稀释 成含菌量为5×105~5×106cfu/mL的芽胞悬液。 ⚫ 2、测定 ⚫ 分4组进行测定：

3、结果处理 ⚫ 将计数结果填入表 ⚫ 分析实验结果是否符合以下标准： ⚫ 3、4、5号管菌数相似，其误差率≤10％。 ⚫ 6号管无菌生长。 ⚫ 2号管菌数明显少于3、4、5组。 ⚫ 1号管不长菌或明显少于2组。 ⚫ 符合上述标准的中和剂表明可消除消毒剂对指 示菌的作用，中和剂及其与消毒剂的中和产物 对指示菌无毒害，判定为该消毒剂的中和剂

3、结果处理 ⚫ 将计数结果填入表 ⚫ 分析实验结果是否符合以下标准： ⚫ 3、4、5号管菌数相似，其误差率≤10％。 ⚫ 6号管无菌生长。 ⚫ 2号管菌数明显少于3、4、5组。 ⚫ 1号管不长菌或明显少于2组。 ⚫ 符合上述标准的中和剂表明可消除消毒剂对指 示菌的作用，中和剂及其与消毒剂的中和产物 对指示菌无毒害，判定为该消毒剂的中和剂

中和剂样品 指示菌 各测定管平均回收菌落数（cfu/mL） 3、4、5号管间误差率（%） 1 2 3 4 5 6 0.5%硫代硫 酸钠 大肠杆菌 枯草杆菌黑 色变 种芽 胞 0.5%硫代硫 酸钠 +1.0% 吐温80 大肠杆菌 枯草杆菌黑 色变 种芽 胞

中和剂样品 指示菌 各测定管平均回收菌落数（cfu/mL） 3、4、5号管间误差率（%） 1 2 3 4 5 6 0.5%硫代硫 酸钠 大肠杆菌 枯草杆菌黑 色变 种芽 胞 0.5%硫代硫 酸钠 +1.0% 吐温80 大肠杆菌 枯草杆菌黑 色变 种芽 胞

五 思考题 ⚫ 中和剂有什么作用？

五 思考题 ⚫ 中和剂有什么作用？