厦门大学：《现代生物实验学》课程教学课件（PPT讲稿）lab-3间接凝集反应检测血清类风湿因子

一 教学要求 ⚫ 学习凝集反应的类型及原理 ⚫ 掌握间接法检测血清类风湿因子的方法 实验三 间接凝集反应检测 血清类风湿因子

一 教学要求 ⚫ 学习凝集反应的类型及原理 ⚫ 掌握间接法检测血清类风湿因子的方法 实验三 间接凝集反应检测 血清类风湿因子

二 实验原理 (1)凝集反应原理 细菌和细胞等颗粒性抗原与相应抗体特异性结合 后，在适量的电解质存在下，可以出现肉眼可见的凝 集现象，并将此种反应称为抗原抗体的凝集反应。根 据检测凝聚反应的条件可将起分为玻片法，试管法和 微量法。根据试验中抗原与抗体的检测方式分为2类： a.直接凝集反应，颗粒性抗原与抗体直接反应而凝集； b.间接凝集反应，将可溶性抗原事先吸附或偶联于与免 疫无关的颗粒载体表面，制成致敏载体颗粒，再与相 应抗体反应。 此方法比较简单，但因敏感性较差，一般只用在 颗粒抗原免疫后抗体效价的检测、血型配型检测和细 菌检测等方面

二 实验原理 (1)凝集反应原理 细菌和细胞等颗粒性抗原与相应抗体特异性结合 后，在适量的电解质存在下，可以出现肉眼可见的凝 集现象，并将此种反应称为抗原抗体的凝集反应。根 据检测凝聚反应的条件可将起分为玻片法，试管法和 微量法。根据试验中抗原与抗体的检测方式分为2类： a.直接凝集反应，颗粒性抗原与抗体直接反应而凝集； b.间接凝集反应，将可溶性抗原事先吸附或偶联于与免 疫无关的颗粒载体表面，制成致敏载体颗粒，再与相 应抗体反应。 此方法比较简单，但因敏感性较差，一般只用在 颗粒抗原免疫后抗体效价的检测、血型配型检测和细 菌检测等方面

（2）间接凝集反应检测类风湿因子原理 类风湿因子（RF）是由于细菌、病毒等感染因子，引 起体内产生的以变性IgG（一种抗体）为抗原的一种自 身抗体。目前已知有四种类风湿因子，即IgM型、IgA 型、IgG型、IgE型。其中IgM和IgA类风湿因子易于检 测，而IgG类风湿因子难于测出。IgA类风湿因子及IgM 类风湿因子对类风湿关节炎诊断有较好的参考价值。 一般医院主要采用乳胶凝集法和酶联免疫吸附法 测定类风湿因子。 将IgG吸附于聚苯乙烯胶乳上，RF与其反应可产生 凝集现象

（2）间接凝集反应检测类风湿因子原理 类风湿因子（RF）是由于细菌、病毒等感染因子，引 起体内产生的以变性IgG（一种抗体）为抗原的一种自 身抗体。目前已知有四种类风湿因子，即IgM型、IgA 型、IgG型、IgE型。其中IgM和IgA类风湿因子易于检 测，而IgG类风湿因子难于测出。IgA类风湿因子及IgM 类风湿因子对类风湿关节炎诊断有较好的参考价值。 一般医院主要采用乳胶凝集法和酶联免疫吸附法 测定类风湿因子。 将IgG吸附于聚苯乙烯胶乳上，RF与其反应可产生 凝集现象

三 材料与器材（略）

三 材料与器材（略）

四 操作步骤 （1）在3块载玻片上分别加一滴RF阳性血 清、RF阴性血清及待检血清。 （2）加20ul IgG致敏的胶乳于各血清样品 中，轻微晃动载玻片混匀。 （3）1 min 后观察凝集反应发生情况

四 操作步骤 （1）在3块载玻片上分别加一滴RF阳性血 清、RF阴性血清及待检血清。 （2）加20ul IgG致敏的胶乳于各血清样品 中，轻微晃动载玻片混匀。 （3）1 min 后观察凝集反应发生情况

五 注意事项 （1）器材要洁净、血清要新鲜、以确保结 果可靠 （2）注意阴性、阳性对照的设立 （3）注意血清及致敏胶乳加样量的比例

五 注意事项 （1）器材要洁净、血清要新鲜、以确保结 果可靠 （2）注意阴性、阳性对照的设立 （3）注意血清及致敏胶乳加样量的比例

六 思考题 （1）记录试验结果并进行分析 （2）探讨影响实验结果的因素

六 思考题 （1）记录试验结果并进行分析 （2）探讨影响实验结果的因素