厦门大学：《现代生物实验学》课程教学课件（PPT讲稿）糖总结.ppt_大学文库

糖模块的总结

一、成绩与问题 1、同学学习态度认真，预习较好，实验原则掌握透彻，试验进展顺利，结果较好；部分同学试验出现失误，但能多次重做到获的良好结果为止。 2、同学们准时到课室，没有出现缺课，逃学现象。 3、其他实验室规章制度遵守好，如损坏东西登记，卫生做得特别好。 4、良好地完成从淀粉提取→酸解→总糖定量测定的系统

二、与糖有关的实验的拓展糖生物学被称为继核酸蛋白质之后的第二里程碑，其反馈的生物信息却远远大于核酸和蛋白质，其重要性涉及到受体、供体、信号传导、免疫、生物合成代谢等生物学重要问题，所以我们虽然学习了糖的一个系统性实验，这个系统的取材是淀粉丰富的材料甘薯，是多糖，含葡萄糖，而生物学中的许多内容与生物研究有关热点是糖蛋白，其种类繁多，组成复杂，所以所学习的系统表现出简单化的局限性。因此同学们会问：糖蛋白中的寡糖和糖链是怎样分离纯化的？其设计原理是什么？

❖ 分离纯化程序图：（一）糖蛋白中寡糖和糖链的分离纯化

❖ —— 高等动、植物，微生物，地衣海藻等材料 ❖ ❖ 醇、醚回流脱脂 ❖ ❖ （冷水，热水，碱性水，酸性水）水抽提（含有许多杂物质，如无机盐，低分子和大分子有机物） ❖ ❖ 分 ❖ 离离子交换、凝胶过滤、透析（去掉小分子） ❖ 蛋白酶，木质素酶等 ❖ 酶解（去掉原有大分子蛋白） ❖ ❖ —— 氯仿或三氟三氯乙酸振荡（得水相，去蛋白） ❖ ❖ ❖ 分部沉淀法盐析金属络合法纤维素柱层析凝胶层析离子交换层析 ❖ 加30%醇或酮 ❖ ❖ ❖ 得沉淀物（大分子糖组分）溶液相 ❖ 纯 ❖ 化加50%醇或酮 ❖ ❖ ❖ 得沉淀物（中等分子组分糖）溶液相 ❖ 加更高浓度的醇或酮 ❖ ❖ 得沉淀物（小分子组分糖）废液 ❖ ——

❖ 盐析：不同糖在不同盐浓度中具有不同溶解度而逐步析出，如NaCl，KCl，（NH4）2SO4等，后者最佳。 ❖ 金属络合法：有些多糖能与铜、钙、钡等络合而沉淀，得到纯化物应该是盐类。 ❖ 纤维素柱层析：多糖混合物用4倍体积乙醇全部沉淀于惰性多孔的纤维素柱上面，然后用由高到低的不同浓度的乙醇洗脱，则不同多糖按小分子组分到大分子组分的顺序被洗脱出来。上述各种纯化方法可以灵活、交替使用，以求获得单组分的样品

（二）有了纯化的单组分的糖，我们可以研究组分中单糖的组成，常用的方法有： 1、纸层析：展层剂常用的是：正丁醇：乙酸：水为4：1： 5，用上层。该展层剂可把葡萄糖，半乳糖，甘露糖，木糖，L-岩藻糖，葡萄糖醛酸，氨基葡萄糖及氨基半乳糖依迁移率的不同而分布在滤纸的不同的位置，而同时用已知单糖点样，层析为参比，即可分析出某组分的糖组成。（示范操作过程及结果分析，今后我们会做这方面实验。） 2、薄层层析法（thin layer chromatography，TLC）：常用的为硅胶G（相当于滤纸）；展层剂可采用上。 3、气相层析（气相色谱） ❖ 流动相——惰性气体，如 CO2，N2等。 ❖ 固定相——担体颗粒表面所包裹的一种高沸点有机化合物。 ❖ 塔板理论

4、HPLC：在液、固相中分配时，与固定相亲和较弱的组分就快速通过层析柱而被记录或收集，反之较后被记录。前两法可用显色法检测。 5、苯胺-二苯胺显色剂：80℃、10min , 醛糖显蓝、蓝紫色或蓝绿色，酮糖呈棕色，检出限量为10ug. 6、苯胺-邻苯二甲酸显色剂：105℃、5-10min, 戊糖显鲜红色,巳醛糖及糖醛酸为棕色,在紫外光下有荧光,而一般戊糖则无荧光,可用来区别戊糖及巳糖,灵敏度为1ug.氨基葡萄糖呈浅棕斑点,紫外下呈黄绿色荧光.后两法可用内标法定性(解释内标法)。 7、非还原糖可采用苯酚-硫酸法