厦门大学：《现代生物实验学》课程教学课件（PPT讲稿）lab-1双向琼脂免疫扩散

一 教学要求 ⚫ 学习双向琼脂免疫实验原理 ⚫ 掌握双向琼脂免疫实验操作方法 ⚫ 学习双向琼脂免疫实验结果分析 实验一 双向琼脂免疫扩散

一 教学要求 ⚫ 学习双向琼脂免疫实验原理 ⚫ 掌握双向琼脂免疫实验操作方法 ⚫ 学习双向琼脂免疫实验结果分析 实验一 双向琼脂免疫扩散

二 实验原理 ⚫ 位于凝胶不同小孔中的抗原和抗体，当两者相对扩散时， 经一定时间后，若两者相对应，会在琼脂小孔间、两者最 恰当的比例处形成白色沉淀线。观察沉淀线的位置、数量、 形状以及对比各沉淀线之间的关系，可对抗原或抗体进行 定性分析。 ⚫ 此方法可应用于以下方面： （1）抗原或抗体的纯度鉴定。也可对抗体效价进行初步估算。 （2）用已知抗血清（或抗原）检测未知抗原（或抗体） （3）抗原或抗体相对分子量的估计 ⚫ 双向琼脂扩散常见孔型有三孔型、双孔型、双排孔型、梅 花孔型（见图1）

二 实验原理 ⚫ 位于凝胶不同小孔中的抗原和抗体，当两者相对扩散时， 经一定时间后，若两者相对应，会在琼脂小孔间、两者最 恰当的比例处形成白色沉淀线。观察沉淀线的位置、数量、 形状以及对比各沉淀线之间的关系，可对抗原或抗体进行 定性分析。 ⚫ 此方法可应用于以下方面： （1）抗原或抗体的纯度鉴定。也可对抗体效价进行初步估算。 （2）用已知抗血清（或抗原）检测未知抗原（或抗体） （3）抗原或抗体相对分子量的估计 ⚫ 双向琼脂扩散常见孔型有三孔型、双孔型、双排孔型、梅 花孔型（见图1）

图1 双向免疫琼脂扩散孔型 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ 三孔型 双孔型 双排孔型 梅花孔型

图1 双向免疫琼脂扩散孔型 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ 三孔型 双孔型 双排孔型 梅花孔型

三 材料与器材（略）

三 材料与器材（略）

四 操作步骤 1.制板：用移液管吸取热琼脂3.5ml，平铺于载玻片上。 2.打孔：待琼脂凝固后，按图1梅花孔型打孔，孔径3mm, 中心孔与边缘孔距离10mm。用针挑去孔内琼脂。 3.用微量加样器将羊抗人IgG抗体及羊抗人IgM（1：30， v/v） 各5ul加入中间孔内。 4.加样：将待检血清用生理盐水稀释成1：2、1：6、1： 10 以及空白（生理盐水）加入周围各孔中，每孔10ul 。 5.将玻璃片置于湿盒内，于37℃温育，隔天观察结果

四 操作步骤 1.制板：用移液管吸取热琼脂3.5ml，平铺于载玻片上。 2.打孔：待琼脂凝固后，按图1梅花孔型打孔，孔径3mm, 中心孔与边缘孔距离10mm。用针挑去孔内琼脂。 3.用微量加样器将羊抗人IgG抗体及羊抗人IgM（1：30， v/v） 各5ul加入中间孔内。 4.加样：将待检血清用生理盐水稀释成1：2、1：6、1： 10 以及空白（生理盐水）加入周围各孔中，每孔10ul 。 5.将玻璃片置于湿盒内，于37℃温育，隔天观察结果

五 注意事项 1.用琼脂浇载玻片时，载玻片必须保持水平位置。 2.每个孔的加样量应保持一致，既使每个孔都被 加满，又必须不使样品溢出孔外。 3.打孔时注意不要将孔弄破

五 注意事项 1.用琼脂浇载玻片时，载玻片必须保持水平位置。 2.每个孔的加样量应保持一致，既使每个孔都被 加满，又必须不使样品溢出孔外。 3.打孔时注意不要将孔弄破

六 思考题 1.画出个孔间的沉淀线位置、数量、形态， 并予以简单的说明 2.对实验结果进行分析

六 思考题 1.画出个孔间的沉淀线位置、数量、形态， 并予以简单的说明 2.对实验结果进行分析