厦门大学：《现代生物实验学》课程教学课件（PPT讲稿）lab2－3 细菌芽孢悬液的制备和消毒剂杀菌效果的定量测定

实验二 细菌芽孢悬液的制备和 实验三 消毒剂杀菌效果的定量测定 一 教学要求 了解消毒方法 掌握化学消毒剂杀菌效果定量测定技术 二 实验原理 1、消毒方法及消毒剂的研究意义

实验二 细菌芽孢悬液的制备和 实验三 消毒剂杀菌效果的定量测定 一 教学要求 了解消毒方法 掌握化学消毒剂杀菌效果定量测定技术 二 实验原理 1、消毒方法及消毒剂的研究意义

Disinfection is the reduction or elimination of pathogenic microorganisms in or on materials so that they are less of a health hazard. – By physical or chemical methods. 广义：清除或杀灭外环境（无生命的表面和物体、体 表皮肤粘膜及表浅体腔）中的病原微生物及其它有害 微生物。 Disinfectant ： disinfectant is generally used for chemical agents employed to disinfect inanimate objects. 广义：包括一些用于杀灭皮肤粘膜上微生物的药品。 Antiseptics：Chemical agents used on living tissue called Antiseptics

Disinfection is the reduction or elimination of pathogenic microorganisms in or on materials so that they are less of a health hazard. – By physical or chemical methods. 广义：清除或杀灭外环境（无生命的表面和物体、体 表皮肤粘膜及表浅体腔）中的病原微生物及其它有害 微生物。 Disinfectant ： disinfectant is generally used for chemical agents employed to disinfect inanimate objects. 广义：包括一些用于杀灭皮肤粘膜上微生物的药品。 Antiseptics：Chemical agents used on living tissue called Antiseptics

应用： 医疗 1847~1850：Semmelweis 1867：Lister 工业 农业 军事

应用： 医疗 1847~1850：Semmelweis 1867：Lister 工业 农业 军事

2、化学消毒剂 按其化学结构的不同可分为：醛类、酚类、醇类、过氧 化物类、季铵盐类、含氯化合物、含碘化合物及烷基化 剂等十几类。 3、EVALUATION OF DISINFECTANTS It is possible to evaluate disinfectants and antiseptics using either in vitro or in vivo tests. An in vitro test is one done under artificial, controlled laboratory conditions. An in vivo （practical test and in-use test）test is one done under the actual conditions of normal use. • in vitro test • in vivo（practical test and in-use test）

2、化学消毒剂 按其化学结构的不同可分为：醛类、酚类、醇类、过氧 化物类、季铵盐类、含氯化合物、含碘化合物及烷基化 剂等十几类。 3、EVALUATION OF DISINFECTANTS It is possible to evaluate disinfectants and antiseptics using either in vitro or in vivo tests. An in vitro test is one done under artificial, controlled laboratory conditions. An in vivo （practical test and in-use test）test is one done under the actual conditions of normal use. • in vitro test • in vivo（practical test and in-use test）

三 材料与器材 ⚫ 菌种：大肠杆菌(8099或ATCC 25922), 金黄色 葡萄球菌(FDA 209 或 ATCC 65380), 枯草杆 菌黑色变种(ATCC 9372) 芽胞. ⚫ 培养基和试剂：营养琼脂培养基; 0.03 mol/L, pH 7.2 磷酸盐缓冲液; 中和剂; 消毒剂. ⚫ 恒温培养箱，菌落计数器等

三 材料与器材 ⚫ 菌种：大肠杆菌(8099或ATCC 25922), 金黄色 葡萄球菌(FDA 209 或 ATCC 65380), 枯草杆 菌黑色变种(ATCC 9372) 芽胞. ⚫ 培养基和试剂：营养琼脂培养基; 0.03 mol/L, pH 7.2 磷酸盐缓冲液; 中和剂; 消毒剂. ⚫ 恒温培养箱，菌落计数器等

四 操作步骤 1、指示微生物菌悬液的制备 细菌繁殖体：金黄色葡萄球菌（ATCC 6538）、大肠杆菌（ 8099或ATCC 25922）；细菌芽胞：枯草杆菌黑色变种芽胞（ ATCC 9732）。 2、中和剂选择 0.5%硫代硫酸钠，1%吐温80 3、定量消毒

四 操作步骤 1、指示微生物菌悬液的制备 细菌繁殖体：金黄色葡萄球菌（ATCC 6538）、大肠杆菌（ 8099或ATCC 25922）；细菌芽胞：枯草杆菌黑色变种芽胞（ ATCC 9732）。 2、中和剂选择 0.5%硫代硫酸钠，1%吐温80 3、定量消毒

• 消毒、中和 A（实验） C（对照） 消毒剂样品 4.5ml PBS 4.5ml 芽孢悬液/菌 体悬液 0.5ml 0.5ml 混匀（计时），芽孢作用20分钟，菌体作用5 分钟 取0.5ml移入一含4.5ml中和剂的试管中，混匀 （计时），作用10分钟

• 消毒、中和 A（实验） C（对照） 消毒剂样品 4.5ml PBS 4.5ml 芽孢悬液/菌 体悬液 0.5ml 0.5ml 混匀（计时），芽孢作用20分钟，菌体作用5 分钟 取0.5ml移入一含4.5ml中和剂的试管中，混匀 （计时），作用10分钟

• 存活菌数的测定 A（实验）：直接取中和反应后的溶液0.5ml测 定（倾注平板法，2个平板/样品）。 C（对照）：取中和液0.5ml，用PBS进行适当 稀释（10-3 、10-4 ）后，取稀释液0.5ml测定（ 倾注平板法，2个平板/稀释度）。 平板置37℃培养48 h，计算菌落数

• 存活菌数的测定 A（实验）：直接取中和反应后的溶液0.5ml测 定（倾注平板法，2个平板/样品）。 C（对照）：取中和液0.5ml，用PBS进行适当 稀释（10-3 、10-4 ）后，取稀释液0.5ml测定（ 倾注平板法，2个平板/稀释度）。 平板置37℃培养48 h，计算菌落数

五 注意事项 ⚫ 注意控制好用于测定的菌体（营养体）悬液及 芽孢悬液的含菌（芽孢）量。 ⚫ 要注意选择合适的中和剂。 六 思考题 ⚫ 如何定量测定某种消毒剂对皮肤的消毒效果？ 试拟出试验步骤。 ⚫ 那些因素会影响消毒剂的杀菌效果？试列举说 明

五 注意事项 ⚫ 注意控制好用于测定的菌体（营养体）悬液及 芽孢悬液的含菌（芽孢）量。 ⚫ 要注意选择合适的中和剂。 六 思考题 ⚫ 如何定量测定某种消毒剂对皮肤的消毒效果？ 试拟出试验步骤。 ⚫ 那些因素会影响消毒剂的杀菌效果？试列举说 明