厦门大学：《现代生物实验学》课程教学课件（PPT讲稿）实验二、总糖和还原糖的测定

实验二 总糖和还原糖的测定

实验二 总糖和还原糖的测定

一、目的要求 掌握碱性铜试剂法测定还原糖的原理和操作方法。 二、原理 单糖和某些寡糖含有游离的醛基或酮基，有还原性， 属于还原糖；而多糖和蔗糖等属于非还原性糖。利用多糖 能被酸水解为单糖的性质可以通过测定水解后的单糖含量 对总糖进行测定。 还原糖的测定方法多种，本实验采用间接滴定法。其 原理是：在碱性溶液中，二价铜离子被还原糖还原成一价 的氧化亚铜，氧化亚铜在酸性环境中与一定量的过量碘起 反应， 再用标准硫代硫酸钠滴定剩余的碘，即可算出还 原糖的含量。反应方程式是：

一、目的要求 掌握碱性铜试剂法测定还原糖的原理和操作方法。 二、原理 单糖和某些寡糖含有游离的醛基或酮基，有还原性， 属于还原糖；而多糖和蔗糖等属于非还原性糖。利用多糖 能被酸水解为单糖的性质可以通过测定水解后的单糖含量 对总糖进行测定。 还原糖的测定方法多种，本实验采用间接滴定法。其 原理是：在碱性溶液中，二价铜离子被还原糖还原成一价 的氧化亚铜，氧化亚铜在酸性环境中与一定量的过量碘起 反应， 再用标准硫代硫酸钠滴定剩余的碘，即可算出还 原糖的含量。反应方程式是：

2NaOH + CuSO4=Cu(OH)2↓+ Na2SO4 COOK COOK Cu(OH)2 + H―C―OH ＝ H―C―O H―C―OH H―C―O COONa COONa Cu + 2 H2O COOK H― C ―O H―C ―O COONa Cu CHO （CHOH）4+ 2 H2O = 2 CH2OH COOK H― C ―OH H―C―OH COONa COOH （ CHOH）4 + Cu2O↓ CH2OH + + 2 酒石酸甲钠 可溶性的氧化铜络合物 葡萄糖 酒石酸甲钠 葡萄糖酸

2NaOH + CuSO4=Cu(OH)2↓+ Na2SO4 COOK COOK Cu(OH)2 + H―C―OH ＝ H―C―O H―C―OH H―C―O COONa COONa Cu + 2 H2O COOK H― C ―O H―C ―O COONa Cu CHO （CHOH）4+ 2 H2O = 2 CH2OH COOK H― C ―OH H―C―OH COONa COOH （ CHOH）4 + Cu2O↓ CH2OH + + 2 酒石酸甲钠 可溶性的氧化铜络合物 葡萄糖 酒石酸甲钠 葡萄糖酸

IO3¯ + 5 I¯ + 6 H 3 I2 + 3 H2O + Cu2O + I2 + H Cu + I ¯+ H2 O + 2+ I2 + 2 S2O3 S4O6 + 2 I¯ 2- 2- 因此，用硫代硫酸钠滴定剩余的碘，在有已知浓度的 标准还原糖浓度时，可以间接地计算出未知样品的还原 糖的含量

IO3¯ + 5 I¯ + 6 H 3 I2 + 3 H2O + Cu2O + I2 + H Cu + I ¯+ H2 O + 2+ I2 + 2 S2O3 S4O6 + 2 I¯ 2- 2- 因此，用硫代硫酸钠滴定剩余的碘，在有已知浓度的 标准还原糖浓度时，可以间接地计算出未知样品的还原 糖的含量

三、试剂与器材 1. 试剂 铜试剂、0.005 mol/L硫代硫酸钠溶液、2%碘化 钾溶液、 0.5 mg/mL标准葡萄糖溶液、1％淀粉指示剂 2. 器材 碱式滴定管、恒温水浴锅

三、试剂与器材 1. 试剂 铜试剂、0.005 mol/L硫代硫酸钠溶液、2%碘化 钾溶液、 0.5 mg/mL标准葡萄糖溶液、1％淀粉指示剂 2. 器材 碱式滴定管、恒温水浴锅

四、操作步骤 1. 取6只试管，按照下表的次序加入试剂。另取6 个小三角烧瓶，按相应的试管顺序编号。 试剂 管号 H2O (mL) 标准葡萄糖 （mL） 还原糖提取液 （mL） 总糖水解液 （mL） 铜试剂 （mL） 沸 水 浴 中 煮 沸 15 分 钟 空 白 试 验 1 2 4 2 2 4 标 准 试 验 1 1 1 4 2 1 1 4 总 糖 试验 1 2 4 2 2 4

四、操作步骤 1. 取6只试管，按照下表的次序加入试剂。另取6 个小三角烧瓶，按相应的试管顺序编号。 试剂 管号 H2O (mL) 标准葡萄糖 （mL） 还原糖提取液 （mL） 总糖水解液 （mL） 铜试剂 （mL） 沸 水 浴 中 煮 沸 15 分 钟 空 白 试 验 1 2 4 2 2 4 标 准 试 验 1 1 1 4 2 1 1 4 总 糖 试验 1 2 4 2 2 4

2. 各试管冷却后，摇动试管，使试管底部的红色沉淀分 散后倾入相应的三角瓶中； 3. 分别在每个试管中加入2mL 2％碘化钾溶液和2mL 2 mol/L H2SO4，以洗涤管中的残留物，并转入相应的试 管中，最后再用1mL蒸馏水洗涤试管2次； 4. 用0.005 mol/L NaS2O3滴定至碘颜色接近消失时加入 淀粉指示剂5滴，继续滴定至蓝色消失为止。 五、计算 X = 0.5 V空 －V标 X（V空－V未知）

2. 各试管冷却后，摇动试管，使试管底部的红色沉淀分 散后倾入相应的三角瓶中； 3. 分别在每个试管中加入2mL 2％碘化钾溶液和2mL 2 mol/L H2SO4，以洗涤管中的残留物，并转入相应的试 管中，最后再用1mL蒸馏水洗涤试管2次； 4. 用0.005 mol/L NaS2O3滴定至碘颜色接近消失时加入 淀粉指示剂5滴，继续滴定至蓝色消失为止。 五、计算 X = 0.5 V空 －V标 X（V空－V未知）

六、注意事项 1. 各试管的处理应一致，测定溶液应同时放入沸 水中，再同时从沸水浴中取出。 2. 在用碘化钾和硫酸洗涤试管时要洗净，否则会 影响滴定结果的准确性。 3. 滴定终点时溶液呈现二价铜离子的浅蓝色，切 勿将它与终点混淆

六、注意事项 1. 各试管的处理应一致，测定溶液应同时放入沸 水中，再同时从沸水浴中取出。 2. 在用碘化钾和硫酸洗涤试管时要洗净，否则会 影响滴定结果的准确性。 3. 滴定终点时溶液呈现二价铜离子的浅蓝色，切 勿将它与终点混淆

七、 思考题 1、碱性铜试剂法测定还原糖是直接滴定还是间 接滴定？两种滴定方法各有何优点？

七、 思考题 1、碱性铜试剂法测定还原糖是直接滴定还是间 接滴定？两种滴定方法各有何优点？