厦门大学：《现代生物实验学》课程教学课件（PPT讲稿）lab-1放线菌的选择分离与计数

一 教学要求 放线菌有多种代谢产物，如抗生素，维生素、氨基酸、 蛋白质、淀粉酶、脂肪酶、纤维素酶等，很多产物在农业、 医疗、食品及国防等领域产生了巨大的效益。 本实验的目的在于学习从土壤等环境中分离放线菌 实验一 放线菌的选择分离与计数

一 教学要求 放线菌有多种代谢产物，如抗生素，维生素、氨基酸、 蛋白质、淀粉酶、脂肪酶、纤维素酶等，很多产物在农业、 医疗、食品及国防等领域产生了巨大的效益。 本实验的目的在于学习从土壤等环境中分离放线菌 实验一 放线菌的选择分离与计数

二 实验原理 土壤中含有丰富的放线菌，但主要是链霉菌，链 霉菌以外的其他放线菌，如小单孢菌、游动放线菌、 诺卡氏菌等，它们是生物活性物质重要的产生菌。但 往往由于样品中稀有放线菌的数量太少，常规的分离 方法很难得到。对样品进行风干、干热处理、培养基 添加重铬酸钾的方法减少细菌和真菌的数量；用干热 和苯酚处理减少链霉菌数量的方法，可以分离得到更 多种类的放线菌

二 实验原理 土壤中含有丰富的放线菌，但主要是链霉菌，链 霉菌以外的其他放线菌，如小单孢菌、游动放线菌、 诺卡氏菌等，它们是生物活性物质重要的产生菌。但 往往由于样品中稀有放线菌的数量太少，常规的分离 方法很难得到。对样品进行风干、干热处理、培养基 添加重铬酸钾的方法减少细菌和真菌的数量；用干热 和苯酚处理减少链霉菌数量的方法，可以分离得到更 多种类的放线菌

三 材料与器材 ⚫ 菜园土或林地土，自然风干，备用。 ⚫ 0.1％ 重铬酸钾溶液，1％苯酚，高氏1号 培养基。 ⚫ 水浴锅等

三 材料与器材 ⚫ 菜园土或林地土，自然风干，备用。 ⚫ 0.1％ 重铬酸钾溶液，1％苯酚，高氏1号 培养基。 ⚫ 水浴锅等

取样及预处理 ⚫ 1、来源：土壤中放线菌最丰富，品种齐全。可以筛选新的放线菌。 从堆肥或过热的材料中如干草或蔗渣中可分离到大量的嗜热放线 菌，从淡水和海洋环境中分离到嗜碱性的和嗜酸性的菌种。 ⚫ 2、取样及预处理 （1）土样：取5cm以下的土样，放于灭菌过的牛皮纸袋中，一般 不放于不透气的瓶子或塑料袋中。气生孢子能耐干燥，耐湿热能 力高于营养体，室温保存20天，放线菌的数量和组成变化不大， 细菌大部分死亡 （2）水样与水低泥样用采泥器和采水器采集，放与灭菌瓶，不密 封 四 操作步骤

取样及预处理 ⚫ 1、来源：土壤中放线菌最丰富，品种齐全。可以筛选新的放线菌。 从堆肥或过热的材料中如干草或蔗渣中可分离到大量的嗜热放线 菌，从淡水和海洋环境中分离到嗜碱性的和嗜酸性的菌种。 ⚫ 2、取样及预处理 （1）土样：取5cm以下的土样，放于灭菌过的牛皮纸袋中，一般 不放于不透气的瓶子或塑料袋中。气生孢子能耐干燥，耐湿热能 力高于营养体，室温保存20天，放线菌的数量和组成变化不大， 细菌大部分死亡 （2）水样与水低泥样用采泥器和采水器采集，放与灭菌瓶，不密 封 四 操作步骤

（1）取体积为300ml的高氏一号培养基，加入0.1%的重铬 酸钾15mL，使之终浓度为50ppm，摇匀，倒平板，待用。 （2）取土样5g，摊平于大号培养皿上，在恒温干燥箱中 120℃干热处理1h。 （3）土样热处理后，加入装有45mL无菌水和少量玻璃珠 的三角瓶中，加入0.5mL的笨酚，室温下振荡30分钟， 静止5分钟，取上清液用无菌水稀释10倍。同时另取土 样5g，不加热和笨酚处理，余步骤同上，作为对照。 （4）用移液管分别吸取原液和10倍稀释液各0.1ml标志稀 释倍数的平板上，涂抹均匀，倒置，28℃培养。 （5）培养10~14d，观察比较不同处理方法的生长情况、 菌落特征。挑取红色，无气生菌丝的小菌落以及其它菌 落形态菌株接种斜面，进一步用于形态观察和鉴定。 分离 操作步骤

（1）取体积为300ml的高氏一号培养基，加入0.1%的重铬 酸钾15mL，使之终浓度为50ppm，摇匀，倒平板，待用。 （2）取土样5g，摊平于大号培养皿上，在恒温干燥箱中 120℃干热处理1h。 （3）土样热处理后，加入装有45mL无菌水和少量玻璃珠 的三角瓶中，加入0.5mL的笨酚，室温下振荡30分钟， 静止5分钟，取上清液用无菌水稀释10倍。同时另取土 样5g，不加热和笨酚处理，余步骤同上，作为对照。 （4）用移液管分别吸取原液和10倍稀释液各0.1ml标志稀 释倍数的平板上，涂抹均匀，倒置，28℃培养。 （5）培养10~14d，观察比较不同处理方法的生长情况、 菌落特征。挑取红色，无气生菌丝的小菌落以及其它菌 落形态菌株接种斜面，进一步用于形态观察和鉴定。 分离 操作步骤

五 注意事项 （1）注意土样在用之前要风干处理20天以上， 以除去大部分的细菌。 （2）注意在培养基中添加重铬酸钾适量

五 注意事项 （1）注意土样在用之前要风干处理20天以上， 以除去大部分的细菌。 （2）注意在培养基中添加重铬酸钾适量

六 思考题 ⚫ 请设计一种分离稀有放线菌的实验方案

六 思考题 ⚫ 请设计一种分离稀有放线菌的实验方案