山东师范大学：《分子生物学实验》课程教学课件（PPT讲稿）实验四 DNA片段的连接（向质粒载体中插入外源DNA）

实验四 DNA片段的连接 （向质粒载体中插入外源DNA）

实验四 DNA片段的连接 （向质粒载体中插入外源DNA）

❖ 实验目的 ❖ 实验原理 ❖ 实验仪器、材料与试剂 ❖ 实验步骤 ❖ 实验结果及讨论

❖ 实验目的 ❖ 实验原理 ❖ 实验仪器、材料与试剂 ❖ 实验步骤 ❖ 实验结果及讨论

实验目的 ❖ 了解DNA片段连接的原理， ❖ 掌握DNA连接的方法

实验目的 ❖ 了解DNA片段连接的原理， ❖ 掌握DNA连接的方法

实验原理 ❖ DNA片段之间的连接主要是在DNA连接酶的作 用下，使DNA裂口上核苷酸裸露的3‘羟基和5’磷 酸之间形成共价结合的磷酸二酯键，使原来断开 的DNA裂口连接起来,需ATP

实验原理 ❖ DNA片段之间的连接主要是在DNA连接酶的作 用下，使DNA裂口上核苷酸裸露的3‘羟基和5’磷 酸之间形成共价结合的磷酸二酯键，使原来断开 的DNA裂口连接起来,需ATP

连接酶：把基因连在一起

连接酶：把基因连在一起

DNA重组

DNA重组

装0 00

实验仪器、材料与试剂 （一）仪器 ❖ 1. 恒温水浴锅或恒温箱 ❖ 2. 微量取液器

实验仪器、材料与试剂 （一）仪器 ❖ 1. 恒温水浴锅或恒温箱 ❖ 2. 微量取液器

（二）材料 ❖ 实验三回收的DNA片段

（二）材料 ❖ 实验三回收的DNA片段

( 三) 试剂 ❖ T4 DNA连接酶 ❖ 10X T4 DNA ligase buffer：Tris-HCl（pH 7.6）； MgCl2；DTT；ATP

( 三) 试剂 ❖ T4 DNA连接酶 ❖ 10X T4 DNA ligase buffer：Tris-HCl（pH 7.6）； MgCl2；DTT；ATP