山东师范大学：《分子生物学实验》课程教学课件（PPT讲稿）实验五 大肠杆菌感受态的制备（CaCl2法）

实验五 大肠杆菌感受态的制备 （CaCl2法）

实验五 大肠杆菌感受态的制备 （CaCl2法）

1. 实验目的 2. 实验原理 3. 实验仪器、材料与试剂 4. 实验步骤 5. 实验结果与讨论

1. 实验目的 2. 实验原理 3. 实验仪器、材料与试剂 4. 实验步骤 5. 实验结果与讨论

实验目的 ⚫ 学习CaCl2法制备大肠杆菌感受态细胞

实验目的 ⚫ 学习CaCl2法制备大肠杆菌感受态细胞

实验原理 ⚫ 用于感受态细胞制备的大肠杆菌菌株一般是 限制-修饰系统缺陷的变异株，即不含限制性 内切酶和甲基化酶的突变株。 ⚫ 受体细胞经过一些特殊方法（如：电击法， CaCl2等化学试剂法）的处理后，细胞膜的通 透性发生变化，成为能容许带有外源DNA的 载体分子进入的感受态细胞

实验原理 ⚫ 用于感受态细胞制备的大肠杆菌菌株一般是 限制-修饰系统缺陷的变异株，即不含限制性 内切酶和甲基化酶的突变株。 ⚫ 受体细胞经过一些特殊方法（如：电击法， CaCl2等化学试剂法）的处理后，细胞膜的通 透性发生变化，成为能容许带有外源DNA的 载体分子进入的感受态细胞

实验仪器、材料与试剂 （一）仪器 ⚫ 1. 恒温摇床 ⚫ 2. 超净工作台 ⚫ 3. 高压灭菌锅 ⚫ 4. 低温离心机 ⚫ 5. 微量取液器

实验仪器、材料与试剂 （一）仪器 ⚫ 1. 恒温摇床 ⚫ 2. 超净工作台 ⚫ 3. 高压灭菌锅 ⚫ 4. 低温离心机 ⚫ 5. 微量取液器

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（二）材料 ⚫ 大肠杆菌DH 5α

（二）材料 ⚫ 大肠杆菌DH 5α

（三）试剂 ⚫ 1. LB液体培养基 ⚫ 2. 0.1mol/L CaCl2溶液

（三）试剂 ⚫ 1. LB液体培养基 ⚫ 2. 0.1mol/L CaCl2溶液

实验步骤 ⚫ 1. 挑取大肠杆菌DH 5α的单菌落，接种于5ml LB液体培养基中，37℃振荡培养14hr。 ⚫ 2. 取2mL菌液加入100ml LB液体培养基中，扩 大培养约2-3h；测OD600值，当OD600约0.4-0.5 时，停止培养。 ⚫ 3. 菌液冰上放置10min，无菌条件下移入50ml Beckman离心管中，4℃，3,500rpm，离心 5min

实验步骤 ⚫ 1. 挑取大肠杆菌DH 5α的单菌落，接种于5ml LB液体培养基中，37℃振荡培养14hr。 ⚫ 2. 取2mL菌液加入100ml LB液体培养基中，扩 大培养约2-3h；测OD600值，当OD600约0.4-0.5 时，停止培养。 ⚫ 3. 菌液冰上放置10min，无菌条件下移入50ml Beckman离心管中，4℃，3,500rpm，离心 5min