山东师范大学：《分子生物学实验》课程教学课件（PPT讲稿）实验二 质粒的酶切、琼脂糖凝胶电泳分离DNA

实验二 质粒的酶切、琼脂糖凝 胶电泳分离DNA

实验二 质粒的酶切、琼脂糖凝 胶电泳分离DNA

1. 实验目的 2. 实验原理 3. 实验仪器、材料与试剂 4. 实验步骤 5. 实验结果及讨论

1. 实验目的 2. 实验原理 3. 实验仪器、材料与试剂 4. 实验步骤 5. 实验结果及讨论

实验目的 ⚫ 限制性内切酶切割出目的DNA ⚫ 了解琼脂糖凝胶电泳的原理 ⚫ 掌握琼脂糖凝胶的制作及进行电泳的方 法

实验目的 ⚫ 限制性内切酶切割出目的DNA ⚫ 了解琼脂糖凝胶电泳的原理 ⚫ 掌握琼脂糖凝胶的制作及进行电泳的方 法

实验原理 ⚫ 利用限制性内切酶具有特定的识别及切割位 点，定点切割环状质粒DNA。 ⚫ 琼脂糖凝胶电泳是基因工程操作中常规的实 验方法，它能检测少量的DNA（如用肉眼观 察，可检测到10 ng的DNA），且检测的范围 很广

实验原理 ⚫ 利用限制性内切酶具有特定的识别及切割位 点，定点切割环状质粒DNA。 ⚫ 琼脂糖凝胶电泳是基因工程操作中常规的实 验方法，它能检测少量的DNA（如用肉眼观 察，可检测到10 ng的DNA），且检测的范围 很广

pBC SK map

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A-OH OH-A 重组子 T载体

⚫ 它的原理是溴化乙锭在紫外光照射下能发射 荧光，当DNA样品在琼脂糖凝胶中从负极向 正极泳动时，溴化乙锭从正极向负极移动， 这样溴化乙锭分子就会嵌入DNA分子中形成 络合物，使DNA在紫外光下发射很强的荧光。 在溴化乙锭足够的情况下，荧光的强度正比 于DNA的含量，这样就可以检测DNA的浓度

⚫ 它的原理是溴化乙锭在紫外光照射下能发射 荧光，当DNA样品在琼脂糖凝胶中从负极向 正极泳动时，溴化乙锭从正极向负极移动， 这样溴化乙锭分子就会嵌入DNA分子中形成 络合物，使DNA在紫外光下发射很强的荧光。 在溴化乙锭足够的情况下，荧光的强度正比 于DNA的含量，这样就可以检测DNA的浓度

实验仪器、材料与试剂 （一） 仪器 ⚫ 1. 水平式凝胶电泳槽 ⚫ 2. 稳压电泳仪 ⚫ 3. 电炉 ⚫ 4. 紫外检测仪 ⚫ 5. 台式离心机

实验仪器、材料与试剂 （一） 仪器 ⚫ 1. 水平式凝胶电泳槽 ⚫ 2. 稳压电泳仪 ⚫ 3. 电炉 ⚫ 4. 紫外检测仪 ⚫ 5. 台式离心机

ELECTROPHORESIS OF PREPARATION OF A GEL DNA STAINING AND DETECTING BANDS OF DNA FRAGMENTS 二=三 RUNNING IN AN ELECTRIC FIELD 8a:.7e ·

（二） 材料 ⚫ 实验一中提取的质粒DNA和酶切后的质 粒DNA

（二） 材料 ⚫ 实验一中提取的质粒DNA和酶切后的质 粒DNA