山东师范大学：《分子生物学实验》课程教学课件（PPT讲稿）实验六 转化及重组子的筛选

实验六 转化及重组子的筛选

实验六 转化及重组子的筛选

1.实验目的 2. 实验原理 3. 实验仪器、材料与试剂 4. 实验步骤 5. 实验结果与讨论

1.实验目的 2. 实验原理 3. 实验仪器、材料与试剂 4. 实验步骤 5. 实验结果与讨论

实验目的 ❖ 了解细胞转化的概念及其在分子生物学研究 中的意义； ❖ 学习外源DNA转化入受体菌细胞并筛选转化 子的方法

实验目的 ❖ 了解细胞转化的概念及其在分子生物学研究 中的意义； ❖ 学习外源DNA转化入受体菌细胞并筛选转化 子的方法

实验原理 ❖ 转化（transformation）是将异源DNA分子导 入另一细胞品系，使受体细胞获得新的遗传 性状的一种手段。其原理是细菌处于0℃， CaCl2低渗溶液中，菌细胞膨胀成球形

实验原理 ❖ 转化（transformation）是将异源DNA分子导 入另一细胞品系，使受体细胞获得新的遗传 性状的一种手段。其原理是细菌处于0℃， CaCl2低渗溶液中，菌细胞膨胀成球形

❖ 转化混合物中的DNA形成抗DNA酶的羟基-钙 磷酸复合物黏附于细胞表面，经42℃短时间热 击处理，促进细胞吸收DNA复合物。进入细胞 的DNA分子通过复制、表达，实现遗传信息的 转移，使受体细胞出现新的遗传性状。 ❖ 将经转化后的细胞在选择性培养基中培养，即 可筛选出转化体(transformant)，即带有异源 DNA分子的受体细胞

❖ 转化混合物中的DNA形成抗DNA酶的羟基-钙 磷酸复合物黏附于细胞表面，经42℃短时间热 击处理，促进细胞吸收DNA复合物。进入细胞 的DNA分子通过复制、表达，实现遗传信息的 转移，使受体细胞出现新的遗传性状。 ❖ 将经转化后的细胞在选择性培养基中培养，即 可筛选出转化体(transformant)，即带有异源 DNA分子的受体细胞

基因导入方法: 1)电击法 (Gene transfer by electroporation)

基因导入方法: 1)电击法 (Gene transfer by electroporation)

基因导入方法: 2)基因枪法(Biolistic￾bombardment)(植物细胞)

基因导入方法: 2)基因枪法(Biolistic￾bombardment)(植物细胞)

Transfer of T-DNA from Agrobacterium into a plant cell

Transfer of T-DNA from Agrobacterium into a plant cell

Regeneration of leaf disks infected by Agrobacterium

Regeneration of leaf disks infected by Agrobacterium

DNA重组

DNA重组