山东师范大学：《分子生物学实验》课程教学课件（PPT讲稿）实验七 聚合酶链式反应（PCR）技术

实验七 聚合酶链式反应 （PCR）技术

实验七 聚合酶链式反应 （PCR）技术

 1. 实验目的  2. 实验原理  3. 实验仪器、材料与试剂  4. 实验步骤  5. 实验结果与讨论

 1. 实验目的  2. 实验原理  3. 实验仪器、材料与试剂  4. 实验步骤  5. 实验结果与讨论

实验目的  掌握PCR反应的原理及技术

实验目的  掌握PCR反应的原理及技术

实验原理  聚合酶链式反应（polymerase chain reaction）简称 PCR技术，是一种体外扩增特异DNA片段的技术。  利用PCR技术可在短时间内获得数百万个特异的DNA序 列的拷贝。PCR技术在分子克隆、遗传病的基因诊断等 方面得到广泛的应用。  PCR技术实际上是在模板DNA、引物和4种脱氧核苷酸 存在的条件下依赖于DNA聚合酶的酶促合成反应。  PCR技术的特异性取决于引物和模板DNA结合的特异性

实验原理  聚合酶链式反应（polymerase chain reaction）简称 PCR技术，是一种体外扩增特异DNA片段的技术。  利用PCR技术可在短时间内获得数百万个特异的DNA序 列的拷贝。PCR技术在分子克隆、遗传病的基因诊断等 方面得到广泛的应用。  PCR技术实际上是在模板DNA、引物和4种脱氧核苷酸 存在的条件下依赖于DNA聚合酶的酶促合成反应。  PCR技术的特异性取决于引物和模板DNA结合的特异性

PCR：变性－退火－延伸

PCR：变性－退火－延伸

PCR

PCR

(c) (b) 引物2 5’ 3’ 3’ 3’ 5’ 5’ (d) 新引物 5’ 3’ 靶DNA的扩增 (a) 5’ 3’ 3’ 5’ 引物1 3’ 5’ 引物2互补链 引物1互补链 单位长度的链 不同长度的链 5’ 3’ 3’ 5’ 引物2互补链 引物1互补链 目的片段（不同长度的链未示出） 聚合酶链式反应示意图 (e) (f) (g)

(c) (b) 引物2 5’ 3’ 3’ 3’ 5’ 5’ (d) 新引物 5’ 3’ 靶DNA的扩增 (a) 5’ 3’ 3’ 5’ 引物1 3’ 5’ 引物2互补链 引物1互补链 单位长度的链 不同长度的链 5’ 3’ 3’ 5’ 引物2互补链 引物1互补链 目的片段（不同长度的链未示出） 聚合酶链式反应示意图 (e) (f) (g)

 反应分为三步：  1.变性：在高温条件下，DNA双链解离形成单链 DNA；  2.退火：当温度突然降低时引物与其互补的模板 在局部形成杂交链；  3.延伸：在DNA聚合酶、dNTPs和Mg2+存在的 条件下，聚合酶催化以引物为起始点的DNA链 延伸反应。  以上三步为一个循环，每一循环的产物可以作为 下一个循环的模板，几十个循环之后，介于两个 引物之间的特异性DNA片段得到了大量复制， 数量可达到~106~7个拷贝

 反应分为三步：  1.变性：在高温条件下，DNA双链解离形成单链 DNA；  2.退火：当温度突然降低时引物与其互补的模板 在局部形成杂交链；  3.延伸：在DNA聚合酶、dNTPs和Mg2+存在的 条件下，聚合酶催化以引物为起始点的DNA链 延伸反应。  以上三步为一个循环，每一循环的产物可以作为 下一个循环的模板，几十个循环之后，介于两个 引物之间的特异性DNA片段得到了大量复制， 数量可达到~106~7个拷贝

 PCR技术的参数主要有7个： 聚合酶、引物、dNTPs、反应buffer、二价 离子、模板、一价离子

 PCR技术的参数主要有7个： 聚合酶、引物、dNTPs、反应buffer、二价 离子、模板、一价离子

实验仪器、材料与试剂 （一）仪器  1. PCR仪  2. 台式离心机  3. 微量取液器

实验仪器、材料与试剂 （一）仪器  1. PCR仪  2. 台式离心机  3. 微量取液器