《微生物学实验》课程教学资源（实验指导）抗生素的抗菌谱测定及抗生菌的抗药性测定

实验8抗生素的抗菌谱测定及抗生菌的抗药性测定 一、目的 1.1了解抗生素对微生物生长的影响，学习抗菌谱试验的基本方法。 1.2学习微生物耐药性的测定方法，了解微生物对抗生素耐药性产生的原因及对策。 二、原理 2.1抗生素抗菌谱的测定：抗生素一是一类由微生物或其它生物生命活动中合成的次级 代谢产物或其人工衍生物，在低浓度时就能抑制或干扰它种生物（包括病原菌、病毒、癌细 胞等)的生命活动，可作为优良的化学治疗剂。各种抗生素有其不同的抑菌范围，即抗菌谱。 如青霉素、红霉素：抗G+:链霉素：抗G:庆大霉素、头孢菌素：兼抗G+和G；氯霉素、 四环素、金霉素、土霉素：G+和G-以及支原体、衣原体和立克次氏体等。了解抗生素的抗 菌谱在临床上具有重要意义，在加入抗生素的培养基上分区接种几种不同的微生物，经过培 养后，根据微生物的生长情况，可以初步确定该抗生素的抗菌谱。 2.2微生物耐药性的测定：耐药性-即抗药性，指微生物、寄生虫或肿瘤细胞对于化学 治疗药物作用的耐受性。耐药性一旦产生，药物的化疗作用就明显下降。将某种微生物接种 于培养基，然后分区贴沾有抗生素药液的滤纸片与接种后的培养基表面，经培养，根据各抗 生素纸片周围抑菌圈情况可初步确定各微生物的耐药情况。 三、材料、试剂与器具 3.1抗生素抗菌谱的测定 菌种：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆茵、普通变形杆菌 培养基：牛肉膏蛋白胨培养基 供试抗生素：青霉素、链霉素、氨苄青霉素、卡那霉素 设备与用具：恒温培养箱、接种环、培养皿 3.2徽生物耐药性的测定 菌种：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、普通变形杆菌 培养基：牛肉音蛋白胨培养基 供试抗生素：青霉素、链霉素、氨苄青霉素、卡那霉素、左氧氟沙星 3.3设备与用具：无菌平皿镊子接种环37℃培养箱超净工作台等 四、操作步骤 4.1抗生素抗菌谱的测定 倒（牛肉青蛋白陈+50丛g/L抗生素）平板 (在无菌操作台进行操作)将加入抗生素的平板大致划分为几个等分，每一等分用记 号笔表明相应的细菌名称，用接种环分别在相应区域接种相应的细菌

实验 8 抗生素的抗菌谱测定及抗生菌的抗药性测定 一、目的 1.1 了解抗生素对微生物生长的影响，学习抗菌谱试验的基本方法。 1.2 学习微生物耐药性的测定方法，了解微生物对抗生素耐药性产生的原因及对策。 二、原理 2.1 抗生素抗菌谱的测定：抗生素—是一类由微生物或其它生物生命活动中合成的次级 代谢产物或其人工衍生物，在低浓度时就能抑制或干扰它种生物（包括病原菌、病毒、癌细 胞等）的生命活动，可作为优良的化学治疗剂。各种抗生素有其不同的抑菌范围，即抗菌谱。 如青霉素、红霉素：抗 G+；链霉素：抗 G-；庆大霉素、头孢菌素：兼抗 G+和 G-；氯霉素、 四环素、金霉素、土霉素：G+和 G-以及支原体、衣原体和立克次氏体等。了解抗生素的抗 菌谱在临床上具有重要意义，在加入抗生素的培养基上分区接种几种不同的微生物，经过培 养后，根据微生物的生长情况，可以初步确定该抗生素的抗菌谱。 2.2 微生物耐药性的测定：耐药性-即抗药性，指微生物、寄生虫或肿瘤细胞对于化学 治疗药物作用的耐受性。耐药性一旦产生，药物的化疗作用就明显下降。将某种微生物接种 于培养基，然后分区贴沾有抗生素药液的滤纸片与接种后的培养基表面，经培养，根据各抗 生素纸片周围抑菌圈情况可初步确定各微生物的耐药情况。 三、材料、试剂与器具 3.1 抗生素抗菌谱的测定 菌种：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、普通变形杆菌 培养基：牛肉膏蛋白胨培养基 供试抗生素：青霉素、链霉素、氨苄青霉素、卡那霉素 设备与用具：恒温培养箱、接种环、培养皿 3.2 微生物耐药性的测定 菌种：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、普通变形杆菌 培养基：牛肉膏蛋白胨培养基 供试抗生素：青霉素、链霉素、氨苄青霉素、卡那霉素、左氧氟沙星 3.3 设备与用具：无菌平皿 镊子 接种环 37°C 培养箱 超净工作台等 四、操作步骤 4.1 抗生素抗菌谱的测定 倒（牛肉膏蛋白胨＋50μg/mL 抗生素）平板 （在无菌操作台进行操作）将加入抗生素的平板大致划分为几个等分，每一等分用记 号笔表明相应的细菌名称，用接种环分别在相应区域接种相应的细菌

将划好线的细菌平板，置37℃倒置培养24-48h。 记录细菌的生长情况，根据其生长情况可以初步确定相应抗生素的抗菌谱 4.2徽生物耐药性的测定 将佥黄色葡萄球菌菌液和大肠杆菌菌液分别涂布在两个平板上，基本涂布均匀。 将平板划分为6个等份，其中5个等份分别标记相应的抗生素名称，1个等分标记为蒸 馏水，将分别浸有抗生素和蒸馏水的小圆滤纸片贴在平板相应的等份中。 将贴好滤纸片的含菌平板置37℃倒置培养24-48h。 观察平板上各小圆纸片周用有无抑菌圈，根据其抑菌圈情况可初步确定各微生物的耐 药情况。 五.实验结果与讨论 5.1抗生素抗菌谱测定的结果 记录几种测试抗生素平板中细菌的生长情况

将划好线的细菌平板，置 37℃倒置培养 24-48h。 记录细菌的生长情况，根据其生长情况可以初步确定相应抗生素的抗菌谱。 4.2 微生物耐药性的测定 将金黄色葡萄球菌菌液和大肠杆菌菌液分别涂布在两个平板上，基本涂布均匀。 将平板划分为 6 个等份，其中 5 个等份分别标记相应的抗生素名称，1 个等分标记为蒸 馏水，将分别浸有抗生素和蒸馏水的小圆滤纸片贴在平板相应的等份中。 将贴好滤纸片的含菌平板置 37℃倒置培养 24-48h。 观察平板上各小圆纸片周围有无抑菌圈，根据其抑菌圈情况可初步确定各微生物的耐 药情况。 五.实验结果与讨论 5．1 抗生素抗菌谱测定的结果 记录几种测试抗生素平板中细菌的生长情况

抗生素 以下测试细菌的生长情况 大肠杆菌 金黄色葡萄球菌 枯草芽孢杆菌 普通变形杆菌 青莓素 氨苄青霉素 链莓素 卡那素 +有细菌生长一无细菌生长 5.2微生物耐药性的测定结果 以下测抗生素周围抑（杀）菌圈直径/ 微生物 青霉素氨苄青霉素链霉素卡那霉素左氧氟沙星 大肠杆菌 金黄色葡萄球菌 枯草芽孢杆蘭 普通变形杆菌 六.思考与问答： 6.1微生物产生耐药性的原因有哪些？ 6.2根据青霉素的抗菌机制，你的实验平板上出现的抑（杀）菌圈是致死效应还是抑制效应？ 若抑（杀）菌圈在隔一段时间后又长出少数菌落，你如何解释这种现象？

+ 有细菌生长 - 无细菌生长 5.2 微生物耐药性的测定结果： 六.思考与问答： 6.1 微生物产生耐药性的原因有哪些？ 6.2 根据青霉素的抗菌机制，你的实验平板上出现的抑（杀）菌圈是致死效应还是抑制效应？ 若抑（杀）菌圈在隔一段时间后又长出少数菌落，你如何解释这种现象？ 抗生素 以下测试细菌的生长情况 大肠杆菌 金黄色葡萄球菌 枯草芽孢杆菌 普通变形杆菌 青霉素 氨苄青霉素 链霉素 卡那霉素 微生物 以下测抗生素周围抑（杀）菌圈直径/mm 青霉素 氨苄青霉素 链霉素 卡那霉素 左氧氟沙星 大肠杆菌 金黄色葡萄球菌 枯草芽孢杆菌 普通变形杆菌