南方医科大学：《抗体工程》课程教学资源（讲稿）转基因小鼠技术——转基因的对象

为什么要选择小鼠 作为转基因的对象 C57BL/6J BALB/cA https://www

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小鼠 在分类学上，小鼠属于哺乳纲 (Mammalia)、啮齿目(Rodentia)、 鼠科(Muridae)、小鼠属(Mus)动物。 小鼠是由小家鼠演变而来。它广泛分布于世 界各地，经长期人工饲养选择培育，已育成 1000多近交系和独立的远交群。 早在17世纪就有人用小鼠做实验，现已成为使用量最大、研究最 详尽的哺乳类实验动物

在分类学上，小鼠属于哺乳纲 （Mammalia）、啮齿目（Rodentia）、 鼠科（Muridae）、小鼠属（Mus）动物。 小鼠是由小家鼠演变而来。它广泛分布于世 界各地，经长期人工饲养选择培育，已育成 1000多近交系和独立的远交群。 小鼠 早在17世纪就有人用小鼠做实验，现已成为使用量最大、研究最 详尽的哺乳类实验动物

血 选择小鼠作为模式生物的 原因： 虽然小鼠和人类在体型大小和形态上相差很大，但在生物进化上非常接近。 2002年，小鼠基因组测序基本完成，当人们把小鼠和人类的基因组进行 对比时，发现二者惊人地相似，99%以上的基因都是同源的。 -一其免疫系统的构成，反应模式，抗体生成的体系均能最大程度地 模拟人类抗体合成的过程。 操作简单，实验周期短，变异类型有可比性。 它是最小的哺乳动物之一。 繁殖和发育速度都特别快(20天孕期，6-8周成熟)。 温顺好饲养

虽然小鼠和人类在体型大小和形态上相差很大，但在生物进化上非常接近。 2002年，小鼠基因组测序基本完成，当人们把小鼠和人类的基因组进行 对比时，发现二者惊人地相似，99%以上的基因都是同源的。 - 操作简单，实验周期短，变异类型有可比性。 它是最小的哺乳动物之一。 温顺好饲养。 选择小鼠作为模式生物的 原因：

70 鼠源g基因的剔除： 小鼠的免疫体系在遇到免疫刺激的时候会优先表 KNOCKOUT MICE 达自身来源的g基因。 在进行转基因之前，要先构建小鼠g基因敲除种系。 如果不消除小鼠自身g基因的表达，人g基因即使导 入，也无法获得充分的活化

小鼠的免疫体系在遇到免疫刺激的时候会优先表 达自身来源的Ig基因。 在进行转基因之前，要先构建小鼠Ig基因敲除种系。 如果不消除小鼠自身Ig基因的表达，人ig基因即使导 入，也无法获得充分的活化

鼠源Ig基因的剔除： IgH,K剔除小鼠 IgH Knockout Igk Knockout IgH,K双剔除小鼠 XX

鼠源Ig基因的剔除： IgH,к剔除小鼠 IgH Knockout Χ Χ Igк Knockout Χ Χ IgH,к双剔除小鼠

基因剔除的 技术基础 基因打靶技术 转基因动物的鉴定技术 基于鼠g基因是个庞大的基因系列， 在ES细胞培养基础上，多种分子生 和人一样，位于多个细胞蔟，要彻 物学技术可以用于鉴定转基因动物 底敲除鼠源性g基因，需要设计多个 的构建效果。 靶点，多次敲出，反复鉴定。 鼠源性g基因是否敲除干净，对于抗 体质量意义重大。 ES细胞转基因动物构建技术 基于鼠g基因的敲出需要多靶点，多次敲除。所以需要有能够体外大规模培养的永生化工程细胞提 供支撑。 ES细胞建立嵌合体转基因动物的稳定体系，为多次的靶基因顶点敲除提供了基础

基于鼠Ig基因是个庞大的基因系列， 和人一样，位于多个细胞蔟，要彻 底敲除鼠源性Ig基因，需要设计多个 靶点，多次敲出，反复鉴定。 鼠源性Ig基因是否敲除干净，对于抗 体质量意义重大。 基因打靶技术 在ES细胞培养基础上，多种分子生 物学技术可以用于鉴定转基因动物 的构建效果。 转基因动物的鉴定技术 ES细胞转基因动物构建技术 基于鼠Ig基因的敲出需要多靶点，多次敲除。所以需要有能够体外大规模培养的永生化工程细胞提 供支撑。 ES细胞建立嵌合体转基因动物的稳定体系，为多次的靶基因顶点敲除提供了基础。 基因剔除的 技术基础

鼠源Ig基因的剔除小鼠的应用： 去除内源性鼠抗体的表达的小鼠，可直接作为受体小鼠，接受人 源性|g基因的导入。 也可作为杂交对象，与导入人源性Ig基因的小鼠杂交。 基本流程： 与人g基因导入小鼠 遗传表征不同的小 →分别针对重链和轻链 →转染E$细胞或受精卵→分别建立稳定敲除内 源性轻重链基因的转 鼠（毛色或眼睛颜 设计打靶载体 基因小鼠 色不同) 建立完全敲除内源性g基因的← 轻链重链基因敲除小鼠相 转基因小鼠 互杂交

鼠源Ig基因的剔除小鼠的应用： 去除内源性鼠抗体的表达的小鼠，可直接作为受体小鼠，接受人 源性Ig基因的导入。 也可作为杂交对象，与导入人源性Ig基因的小鼠杂交。 基本流程： 与人Ig基因导入小鼠 遗传表征不同的小 鼠（毛色或眼睛颜 色不同） 分别针对重链和轻链 设计打靶载体 转染ES细胞或受精卵 分别建立稳定敲除内 源性轻重链基因的转 基因小鼠 轻链重链基因敲除小鼠相 互杂交 建立完全敲除内源性Ig基因的 转基因小鼠

鼠源Ig基因的剔除： IgH,K剔除小鼠 IgH Knockout Igk Knockout 1gH,K双剔除小鼠 XX

鼠源Ig基因的剔除： IgH,к剔除小鼠 IgH Knockout Χ Χ Igк Knockout Χ Χ IgH,к双剔除小鼠

Ig基因导入的技术基础 基因文库技术： 基因文库课以提供多个基因位点的完整Ig基因 人源lgH 人工染色体技术： 大容量的染色体载体可以实现大基因片段 的连接，拼接，和转移 转基因动物的鉴定技术： 人源gL 原位杂交技术和功能鉴定技术(ELISA),可以确 定人g基因的正确导入和功能实现

人源IgH 人源IgL 基因文库课以提供多个基因位点的完整Ig基因 大容量的染色体载体可以实现大基因片段 的连接，拼接，和转移 原位杂交技术和功能鉴定技术（ELISA)，可以确 定人Ig基因的正确导入和功能实现。 转基因动物的鉴定技术：

谢谢！

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