南方医科大学：《抗体工程》课程教学资源（PPT课件）抗体相关技术（抗体的分离纯化——纯化凝胶过滤）

抗体相关技术 王穗海 检验与生物技术学院抗休工程研宪所 wangsuihai1219@163.com

抗体相关技术 王穗海 检验与生物技术学院抗体工程研究所 wangsuihai1219@163.com

抗体相关技术 1,抗体的结构、分类和性质 2,抗体的分离纯化 3,抗体的应用

1，抗体的结构、分类和性质 2，抗体的分离纯化 3，抗体的应用 抗体相关技术

杭体的纯化技木 溶剂沉淀方法 层析技术

抗体的纯化技术 溶剂沉淀方法 层析技术

蛋白质的两性电离 COOH H" C00 C00 Pr PK NH OH NH pHpl 蛋白质的等电点(isoelectric point,pI) √当蛋白质溶液处于某一pH时，蛋白质解离成正、负离 子的趋势相等，即成为兼性离子，净电荷为零，此时 溶液的pH称为蛋白质的等电点

Pr COOH NH3 + Pr COO￾NH3 + Pr COO￾NH2 OH￾H+ OH￾H+ pHpI 蛋白质的两性电离 蛋白质的等电点( isoelectric point, pI) ✓ 当蛋白质溶液处于某一pH时，蛋白质解离成正、负离 子的趋势相等，即成为兼性离子，净电荷为零，此时 溶液的pH称为蛋白质的等电点

蛋白质有胶体性质 蛋白分子颗粒大小1-100nm之间，属胶体颗粒范围， 在溶液中能形成稳定的胶体。 表面形成水化层 原因 表面同种电荷的示力 除去这两个因素，蛋白就会发生沉淀

蛋白分子颗粒大小1-100nm之间,属胶体颗粒范围， 在溶液中能形成稳定的胶体。 原因 蛋白质有胶体性质 表面形成水化层 表面同种电荷的斥力 除去这两个因素,蛋白就会发生沉淀。 + + + + + + + － － － － － －－ －

水化层 酸 碱 白质胶体溶液 酸 带正电荷的蛋白质 在等电点的蛋白质 带负电荷的蛋白质 脱水作用 脱水作用 脱水作用 沉淀作用示意 酸 带正电荷的蛋白质 不稳定的蛋白质颗粒 带负电荷的蛋白质 蛋白质的聚沉

+ + + + + + + 带正电荷的蛋白质 － － － － － － － － 在等电点的蛋白质 带负电荷的蛋白质 水化层 + + + + + + + + 带正电荷的蛋白质 － － － － － － － － 不稳定的蛋白质颗粒 带负电荷的蛋白质 碱 酸 酸 碱 碱 酸 脱水作用 脱水作用 脱水作用 蛋白质的聚沉 蛋 白 质 胶 体 溶 液 沉 淀 作 用 示 意 图

沉淀方法类别 高浓度中性盐（盐析） 。有机溶剂沉淀 。重金属盐类沉淀 。生物碱试剂和某些酸类沉淀

沉淀方法类别  高浓度中性盐（盐析）  有机溶剂沉淀  重金属盐类沉淀  生物碱试剂和某些酸类沉淀

盐析法 蛋白质在纯水和不同 盐浓度溶液中的相对 AeSa.li形e-Reee 溶解度不同，在一定 Amm onium 溶解度 sulfate 的温度下随着盐浓度 的增加蛋白质在溶液 中的溶解度下降，当 Sodium 盐浓度增加到某个程 sulfate 度时，蛋白质就从溶 lonic strength 液中析出，这种现象 称为盐析

盐析法  蛋白质在纯水和不同 盐浓度溶液中的相对 溶解度不同，在一定 的温度下随着盐浓度 的增加蛋白质在溶液 中的溶解度下降，当 盐浓度增加到某个程 度时，蛋白质就从溶 液中析出，这种现象 称为盐析

盐析的原理 。争夺水膜层 Aggregate 。中和电荷 因为这些盐类离子与水的亲和性大，又是强电解质，可与蛋白质争夺水分子，破坏蛋白质表 面的水化膜，另外，还能大量中和蛋白质颗粒上的电荷，使蛋白质既不含水膜又不含电荷， 从而聚集沉淀

盐析的原理 争夺水膜层 中和电荷 因为这些盐类离子与水的亲和性大,又是强电解质,可与蛋白质争夺水分子,破坏蛋白质表 面的水化膜,另外,还能大量中和蛋白质颗粒上的电荷,使蛋白质既不含水膜又不含电荷, 从而聚集沉淀

分段盐析 。调节蛋白质中盐浓度，可使不同蛋白质分别沉淀。 (NH4)2S04 (NH4)2S04 腹水 球蛋白 IgG 50%饱和度 33%饱和度 析出 析出 饱和度：在给定条件下以可能达到的最大浓度的百 分数表示的盐浓度

分段盐析 腹水 球蛋白 IgG (NH4)2SO4 50%饱和度 析出 析出 33%饱和度 (NH4)2SO4  调节蛋白质中盐浓度，可使不同蛋白质分别沉淀。 饱和度：在给定条件下以可能达到的最大浓度的百 分数表示的盐浓度