《设施农业工程工艺》课程实验指导书（不同工艺模式下猪的活动、探究与排泄行为观察试验；植物组培快繁工艺与环境测试）

《设施农业工程工艺》课程实验指导书施正香，曲英华，邓健编实验一不同工艺模式下猪的活动、探究与排泄行为观察试验一、实验目的猪的行为表现正常与否，在很大程度上取决于所处饲养环境状况好坏及其工程设施是否配套。不同工艺模式下猪因所处环境的差异，行为表现各不相同。本实验的目的是通过实地详细观察记录和统计分析不同饲养工艺模式下猪的采食、饮水、睡眠、躺卧、争斗、探究、排泄等行为，理解不同工艺模式、饲养环境及其工程设施配套技术下猪的行为反应，为今后开展合理的设施养殖工程设计提供思路。二、实验内容在动物环境模拟实验室中，通过TheObserverVideo-Pro数字式行为图像记录分析仪实地详细观察记录和统计分析不同饲养工艺模式下猪的采食、饮水、睡眠、躺卧、争斗、探究、排泄等行为。该观察试验全班分成5个大组，每位同学可针对某一行为指标的频谱进行提取，然后将组内所有人提取的频谱集中进行统计分析，每个小组完成1份实验报告。三、实验仪器及材料3.1现场或实验过程视频记录系统SonyDSR-19OP数字摄像机1台或电视专业摄像头3个、普通录像机1台、长延时录像机1台、图像分割仪（4分画面整合器）1台、5DVM60R3录像带若干盘等。3.2基于视频的行为分析系统DELL计算机1台、视频采集卡和行为时间编码器等一套、行为分析软件TheOBSERVER5.1一套、加密狗一个。3.3工艺模式及供试实验动物工艺模式：选择圈栏饲养、舍饲散养2种工艺模式。供试动物：28～70日龄阶段仔猪，两种模式中分别选取5头猪样本，进行个体和群体行为的连续记录。四、试验观察与记录1

1 《设施农业工程工艺》课程实验指导书 施正香，曲英华，邓健 编 实验一 不同工艺模式下猪的活动、探究与排泄行为观察试验 一、实验目的 猪的行为表现正常与否, 在很大程度上取决于所处饲养环境状况好坏及其工程设施是 否配套。不同工艺模式下猪因所处环境的差异，行为表现各不相同。本实验的目的是通过实 地详细观察记录和统计分析不同饲养工艺模式下猪的采食、饮水、睡眠、躺卧、争斗、探究、 排泄等行为，理解不同工艺模式、饲养环境及其工程设施配套技术下猪的行为反应，为今后 开展合理的设施养殖工程设计提供思路。 二、实验内容 在动物环境模拟实验室中，通过 The Observer Video-Pro 数字式行为图像记录分析仪， 实地详细观察记录和统计分析不同饲养工艺模式下猪的采食、饮水、睡眠、躺卧、争斗、探 究、排泄等行为。该观察试验全班分成 5 个大组，每位同学可针对某一行为指标的频谱进行 提取，然后将组内所有人提取的频谱集中进行统计分析，每个小组完成 1 份实验报告。 三、实验仪器及材料 3.1 现场或实验过程视频记录系统 Sony DSR-190P 数字摄像机 1 台或电视专业摄像头 3 个、普通录像机 1 台、长延时录 像机 1 台、图像分割仪（4 分画面整合器）1 台、5DVM60R3 录像带若干盘等。 3.2 基于视频的行为分析系统 DELL 计算机 1 台、 视频采集卡和行为时间编码器等一套、 行为分析软件 The OBSERVER5.1 一套、加密狗一个。 3.3 工艺模式及供试实验动物 工艺模式：选择圈栏饲养、舍饲散养 2 种工艺模式。 供试动物：28～70 日龄阶段仔猪，两种模式中分别选取 5 头猪样本，进行个体和群体 行为的连续记录。 四、试验观察与记录

4.1试验观察记录前的准备工作（1）熟悉数字摄像机使用及注意事项（2）了解并掌握行为分析系统软件的使用：（3）了解猪的不同行为特征；（4）将被观察的猪只分别做好标记：（5）了解远程信号数据传输系统如何实现，掌握实时传回实验室的图像资料处理的方法。4.2现场记录及时间要求对所观察的样本除了用摄像机记录外，还应手工记录观察时间中的样本主要行为表现的表现次数、时长等信息。要求现场观测时间每组不少于10小时。4.3观察记录中须注意的问题1、目标动物要进行清晰的标识。目标动物的数量选取，一是根据动物种类、大小而定，二是遵循抽样统计原理，行为动物的样本量一般需要10-20个。2、根据研究动物行为特点，编制行为谱，其前期工作在摄像时就要做到心中有数。3、TheOBSERVER5.1软件是用加密狗控制的，一次只能在1台计算机上使用，故对加密狗要倍加爱护，损坏或丢失都影响后续使用。在运行TheOBSERVER5.1过程中，注意关闭其它程序并切断网络，以免死机现象发生。五、实验报告1、每组学生按表1记录表格式依次填写清楚，记录表不够时可参考其下表格式自行设计。2、通过对不同工艺模式下猪的行为观察与记录，分析饲养环境对猪的行为影响，并针对猪的不同工艺模式结合所学专业知识提出自己的相关结论与合理化建议。每人写1份研究报告。2

2 4.1 试验观察记录前的准备工作 （1） 熟悉数字摄像机使用及注意事项； （2）了解并掌握行为分析系统软件的使用； （3）了解猪的不同行为特征； （4）将被观察的猪只分别做好标记； （5）了解远程信号数据传输系统如何实现，掌握实时传回实验室的图像资料处理的方 法。 4.2 现场记录及时间要求 对所观察的样本除了用摄像机记录外，还应手工记录观察时间中的样本主要行为表现 的表现次数、时长等信息。要求现场观测时间每组不少于 10 小时。 4.3 观察记录中须注意的问题 1、目标动物要进行清晰的标识。目标动物的数量选取，一是根据动物种类、大小而定， 二是遵循抽样统计原理，行为动物的样本量一般需要 10-20 个。 2、根据研究动物行为特点，编制行为谱，其前期工作在摄像时就要做到心中有数。 3、The OBSERVER5.1 软件是用加密狗控制的，一次只能在 1 台计算机上使用，故对 加密狗要倍加爱护，损坏或丢失都影响后续使用。在运行 The OBSERVER5.1 过程中，注意 关闭其它程序并切断网络，以免死机现象发生。 五、实验报告 1、每组学生按表 1 记录表格式依次填写清楚，记录表不够时可参考其下表格式自行设 计。 2、通过对不同工艺模式下猪的行为观察与记录，分析饲养环境对猪的行为影响，并针 对猪的不同工艺模式结合所学专业知识提出自己的相关结论与合理化建议。每人写 1 份研究 报告

表1 不同工艺模式下猪的行为观察试验记录表时间周龄XX××工艺模式下猪的各种行为表达备注说明躺卧站立采食饮水争斗拱咬排泄6: 008: 0010:0012: 0014: 0016:0018:00注：表中所记数字为各时刻记录的猪的各种行为头数占试验猪头数的百分数3

3 表 1 不同工艺模式下猪的行为观察试验记录表 时间 周龄 ××××工艺模式下猪的各种行为表达 备注说明 躺 卧 站 立 采 食 饮 水 争 斗 拱 咬 排 泄 6: 00 8: 00 10: 00 12: 00 14: 00 16: 00 18: 00 注：表中所记数字为各时刻记录的猪的各种行为头数占试验猪头数的百分数

附TheObserverVideo-Pro行为观察者视频系统（数字式行为图像记录分析仪）操作规程1系统构成（1）现场或实验过程视频记录系统Noldusr Wden-ERecording paSonyDSR-190P数字摄像机1台电视专业摄像头3个固定架和外置器各3个cd红外灯2个ouywre普通录像机1台长延时录像机1台图像分割仪（4分画面整合器）1台(2）基于视频的行为分析系统tysispaDELL计算机1台视频采集卡和行为时间编码器等一套ySVSVCE行为分析软件TheOBSERVER5.1一套2 工作程序（1）视频记录-获取现场或实验过程中动物行为原始信息的影像文件a)运用SonyDSR-190P专业数码摄像机的记录用一盘60分钟的DV录像带可以完成24小时的记录而中间不用换带，但是每半分钟只连续记录2秒。推荐方式1：数码摄像机60分钟连续记录；推荐方式2：数码摄像机+笔记本电脑（奔腾4，CPU至少2G，内存至少520M，显存至少64M，硬盘至少40g）可连续记录至少2小时，保存在电脑上的2小时的1个影像文件最终大小为500m-1G，而WindowsMovieMaker在编辑过程中至少需要20G干净的硬盘空间。b）运用4个普通专业摄像头+长延时录像机+图像分割仪的记录可对4个现场或实验过程同时记录。一盘180分钟录像带的记录方式有2种：在180分钟以内，采用普通记录即每秒摄录25-30顺画面：180分钟以上至24小时，选择长延时记录即每秒摄录5-6帧画面，其时间仍为1秒。记录有24小时信息的180分钟录像带，最终被转存在DELL台式电脑上，以WMV影像文件格式保存。根据需要，可用WindoWsMovieMaker对所录影像文件进行剪辑。夜间记录时，需要配置红外光源。4

4 附 The Observer Video-Pro 行为观察者视频系统 （数字式行为图像记录分析仪）操作规程 1 系统构成 (1)现场或实验过程视频记录系统 Sony DSR-190P 数字摄像机 1 台 电视专业摄像头 3 个 固定架和外置器各 3 个 红外灯 2 个 普通录像机 1 台 长延时录像机 1 台 图像分割仪（4 分画面整合器）1 台 (2)基于视频的行为分析系统 DELL 计算机 1 台 视频采集卡和行为时间编码器等一套 行为分析软件The OBSERVER5.1一套 2 工作程序 (1)视频记录-获取现场或实验过程中动物行为原始信息的影像文件 a)运用 Sony DSR-190P 专业数码摄像机的记录 用一盘 60 分钟的 DV 录像带可以完成 24 小时的记录而中间不用换带，但是每半分钟只 连续记录 2 秒。推荐方式 1：数码摄像机 60 分钟连续记录；推荐方式 2：数码摄像机+笔记 本电脑（奔腾 4，CPU 至少 2G,内存至少 520M，显存至少 64M，硬盘至少 40g）可连续记录至 少 2 小时，保存在电脑上的 2 小时的 1 个影像文件最终大小为 500m1G，而 Windows Movie Maker 在编辑过程中至少需要 20G 干净的硬盘空间。 b)运用 4 个普通专业摄像头+长延时录像机+图像分割仪的记录 可对 4 个现场或实验过程同时记录。一盘 180 分钟录像带的记录方式有 2 种：在 180 分钟以内，采用普通记录即每秒摄录 25-30 帧画面；180 分钟以上至 24 小时，选择长延时 记录即每秒摄录 5-6 帧画面，其时间仍为 1 秒。记录有 24 小时信息的 180 分钟录像带，最 终被转存在 DELL 台式电脑上，以 WMV 影像文件格式保存。根据需要，可用 Windows Movie Maker 对所录影像文件进行剪辑。夜间记录时，需要配置红外光源

c自标动物标识和样本量选取在运用以上2大类摄录方法时，目标动物要进行清晰的标识。目标动物的数量选取，一是根据动物种类、大小而定，二是遵循抽样统计原理，行为动物的样本量一般需要10-20个。（2）基于视频文件的行为指标的量化处理和分析根据TheOBSERVER5.1，行为观察程序分为三步。a)分析方案制定-编制行为谱根据研究动物行为特点，编制行为谱，其前期工作在摄像时就要做到心中有数。首先，确立“目标动物抽样及连续扫描”的记录和分析方案，以建立个体化量化的耦合行为编码数据库。第二，区别状态行为和事件行为。状态行为一般是指持续时间在1秒以上的行为，事件行为往往是持续时间低于1秒且重复出现的行为，如鸡的食动作。第三，行为功能的耦合信息编码。每种行为包含动作、指向、姿势、表情、空间方位等功能，可实现行为功能耦合的分类和组合，一般可分为若干水平。指向。指向物体，如鸡啄地、壁、食槽等；指向其它动物，如鸡的啄羽行为，根据其部位不同可分为头羽、背羽、翅羽、胸羽、肛腹羽、尾羽6种。姿势。有站姿、跨姿、卧姿之分。表情。哺乳动物表情较丰富，区分惊恐、平静等表情。可结合眼闭合、鼻翁、耳廓转动、唇开合、舌动等细微动作加以判断。空间位置。不同行为在不同空间区域有其特定功能，则要细化行为的功能分区。对每种行为细化分类，均用不同的字符键及其组合方式表示，以实现行为功能的耦合信息编码的记录。b）播放视频并按键记录

5 c)目标动物标识和样本量选取 在运用以上 2 大类摄录方法时，目标动物要进行清晰的标识。目标动物的数量选取， 一是根据动物种类、大小而定，二是遵循抽样统计原理，行为动物的样本量一般需要 10-20 个。 (2)基于视频文件的行为指标的量化处理和分析 根据 The OBSERVER5.1，行为观察程序分为三步。 a)分析方案制定-编制行为谱 根据研究动物行为特点，编制行为谱，其前期工作在摄像时就要做到心中有数。 首先，确立“目标动物抽样及连续扫描”的记录和分析方案，以建立个体化量化的耦 合行为编码数据库。 第二，区别状态行为和事件行为。状态行为一般是指持续时间在 1 秒以上的行为，事 件行为往往是持续时间低于 1 秒且重复出现的行为，如鸡的啄食动作。 第三，行为功能的耦合信息编码。每种行为包含动作、指向、姿势、表情、空间方位 等功能，可实现行为功能耦合的分类和组合，一般可分为若干水平。 指向。指向物体，如鸡啄地、壁、食槽等；指向其它动物，如鸡的啄羽行为，根据其 部位不同可分为头羽、背羽、翅羽、胸羽、肛腹羽、尾羽 6 种。 姿势。有站姿、蹲姿、卧姿之分。 表情。哺乳动物表情较丰富，区分惊恐、平静等表情。可结合眼闭合、鼻翕、耳廓转 动、唇开合、舌动等细微动作加以判断。 空间位置。不同行为在不同空间区域有其特定功能，则要细化行为的功能分区。 对每种行为细化分类，均用不同的字符键及其组合方式表示，以实现行为功能的耦合 信息编码的记录。 b) 播放视频并按键记录

TheOBSERVER5.1，调入视频文件即可对目标动物的各种行为进行记录。观察者注视视频中目标动物的行为变化，当某个行为出现时，则按下这个行为所对应的字符键即可。在当前界面中，有事件记录器、操作过程的控制器等。按暂停键，观察者可以从事其他活动，按恢复键则继续观察记录；按修改键，可对误操作的记录进行修改；对动物睡眠等持续时间较长的静态行为，可按快进键加快记录而不影响其时间值。由于这种观察对体力和脑力要求较高，故建议一次观察中一个影像文件最多不超过3个小时。除非必要，则对3小时以上的视频文件进行连续的记录。c)记录结果的分析及数据保存和输出观察记录结束后，软件会自动生成每个状态行为的总时间、频次、最大持续时间、最小持续时间、潜伏期、平均持续时间等15项测定指标。建议，对状态行为结果数据，选取平均持续时间、频次和潜伏期3个指标，对事件行为仅仅选用频次1个指标。之后加以保存，并以Excel文件格式输出报告表，后者可以在统计软件下进行进一步的检验分析。pig-ElementaryStatistics-StatisticsReOXeport(4)Behavio Modifier14MearStatisticTotalnumberTotalduratioduration (s)581.247.36walking79420.825.21siffingfloor76.682.56feeder30SI47.521.88sniffingdrinkni1328.702.21sniffingwall1867.203.73steel dowood doo828.383.55sndne4.13sniffinggrid416.500.660.66circling813.281.66standing24.79other9.5859.164.2314upstandfeeder7.1942301.92loc95.663.68loc22642300.687.16loc336loc4211.465.87crossing146-Pig1502Pig1503Pig150De除数据报告表以外，程序还可产生行为序直观图的结果ESllwae-TmetvendSobjeaBehav.CassMoodSbeeUwte-ShedTaCmnaotKaaeAomm还可进行可靠性分析，即对2个观察者对同一视频文件的记录结果进行一致性分析。一致性达到85%以上，则视为可靠性良好。6

6 The OBSERVER5.1，调入视频文件即可对目标动物的各种行为进行记录。观察者注视 视频中目标动物的行为变化，当某个行为出现时，则按下这个行为所对应的字符键即可。在 当前界面中，有事件记录器、操作过程的控制器等。按暂停键，观察者可以从事其他活动， 按恢复键则继续观察记录；按修改键，可对误操作的记录进行修改；对动物睡眠等持续时间 较长的静态行为，可按快进键加快记录而不影响其时间值。 由于这种观察对体力和脑力要求较高，故建议一次观察中一个影像文件最多不超过 3 个小时。除非必要，则对 3 小时以上的视频文件进行连续的记录。 c)记录结果的分析及数据保存和输出 观察记录结束后，软件会自动生成每个状态行为的总时间、频次、最大持续时间、最 小持续时间、潜伏期、平均持续时间等 15 项测定指标。建议，对状态行为结果数据，选取 平均持续时间、频次和潜伏期 3 个指标，对事件行为仅仅选用频次 1 个指标。之后加以保存， 并以 Excel 文件格式输出报告表，后者可以在统计软件下进行进一步的检验分析。 除数据报告表以外，程序还可产生行为序直观图的结果 还可进行可靠性分析，即对 2 个观察者对同一视频文件的记录结果进行一致性分析。 一致性达到 85%以上，则视为可靠性良好

Pig150Pig150.2Resutt or CoemparisonsAFetMAAmRlAgreemert22-7-1997 00:00:12.68S.bio198700:00:12.68SbiedtsitfingwAgreement22-7-1997 00:0013.62S,1987.00:00:13.62S.biedtwwin19reemenAgrreemen22.7.10M2-7-1967 00.00 30.76 /S.422-7-1997 00.00:30.76SAgreemer22-7-1997 00:00:33.60S.bjectsnitfing teei22-7-199700:00:33.60Subject anitfing teederStstietical MesstKContusonMwXistafceomparidF3注意事项TheOBSERVER5.1软件是用加密狗控制的，一次只能在1台计算机上使用，故对加密狗要倍加爱护，损坏或丢失都影响后续使用。在运行TheOBSERVER5.1过程中，注意关闭其它程序并切断网络，以免死机现象发生。7

7 3 注意事项 The OBSERVER5.1 软件是用加密狗控制的，一次只能在 1 台计算机上使用，故对加密 狗要倍加爱护，损坏或丢失都影响后续使用。在运行 The OBSERVER5.1 过程中，注意关闭 其它程序并切断网络，以免死机现象发生

实验二植物组培快繁工艺与环境测试植物组培快繁，又称离体快繁、微繁是以植物细胞全能性为理论基础，从植物细胞生物学中发展起来的一项生物技术，它是目前农业生物技术的重要组成之一，是生物技术在农业生产上应用最广泛、最成功的一个领域。植物组培快繁是利用无菌操作的方法，将植物的分生组织、器官或细胞，移植在人工培养基上，通过细胞的分裂、增殖、分化、发育、最终长成完整的植株。它具有紧殖速度快、占用空间小、便于种质保存与交换、诱变突变体等优点。一、实验目的通过实验，了解植物组培快繁的特点、植物组培快繁的工艺流程，掌握组培快繁的基本操作方法以及主要环境参数的测试方法。二、实验用品1材料：花卉、蔬菜、林木等组培瓶苗。2仪器：天平、PH测试仪、高压灭菌器、干热灭菌箱、超净工作台、培养箱或培养室。3用具及玻璃器血：镊子、解部刀、解剖剪、酒精灯、培养瓶、封口膜、线绳、记号笔、试剂瓶（50、100、500、1000ml）、广口瓶（100ml）、刻度吸管（0.5、1.0、5.0、10.0ml）、容量瓶（50、100、500、1000ml）、量筒（100、500、1000ml）、烧杯（100、500、1000ml）、培养皿、玻璃棒、滴瓶、吸球、白大褂、帽子、胶皮手套（手术用）、口罩、火柴、脱脂棉、称量纸、不锈钢药勺4药品及试剂：药品（见培养基配制表）；75%酒精三、实验方法1培养基母液的配置配制培养基前先要配制母液。母液分大量元素、微量元素、铁盐及有机物质四类。各类成分、浓度、用量见表9。2培养基的配置与分装①取1000ml烧杯，先加入600ml左右的蒸馏水，然后分别加入大量元素10倍母液100ml，微量元素100倍母液10ml，铁盐100倍母液10ml，有机物质100倍母液10ml。此外，根据培养材料和不同培养阶段还要加入一定量的生长激素类（如马铃薯在增殖阶段加入0.5mg/L的细胞分裂素类物质下基嘌呤（6-BA）有利于茎叶分化，生根阶段加入0.1～0.5mg/L的生长素类萘乙酸（NAA）有利于生根。然后将混合液倒入量筒，用蒸馏水定溶至1000ml。②将定溶后的溶液倒入锅内，加白糖30g（糖浓度3%），溶化。③调节PH值，用1mol/L的NaOH或HCI调节酸碱度为PH5.8。④加入琼脂粉6g，（0.6%）放在电磁炉上，煮沸融化。培养基的分装，每个培养瓶内装60ml，分装时要避免把培养基倒在瓶口上，否则培养8

8 实验二 植物组培快繁工艺与环境测试 植物组培快繁，又称离体快繁、微繁是以植物细胞全能性为理论基础，从植物细胞生 物学中发展起来的一项生物技术，它是目前农业生物技术的重要组成之一，是生物技术在农 业生产上应用最广泛、最成功的一个领域。 植物组培快繁是利用无菌操作的方法，将植物的分生组织、器官或细胞，移植在人工 培养基上，通过细胞的分裂、增殖、分化、发育、最终长成完整的植株。它具有繁殖速度快、 占用空间小、便于种质保存与交换、诱变突变体等优点。 一、实验目的 通过实验，了解植物组培快繁的特点、植物组培快繁的工艺流程，掌握组培快繁的基 本操作方法以及主要环境参数的测试方法。 二、实验用品 1 材料：花卉、蔬菜、林木等组培瓶苗。 2 仪器：天平、PH 测试仪、高压灭菌器、干热灭菌箱、超净工作台、培养箱或培养室。 3 用具及玻璃器皿：镊子、解剖刀、解剖剪、酒精灯、培养瓶、封口膜、线绳、记号笔、试 剂瓶（50、100、500、1000ml）、广口瓶（100 ml）、刻度吸管（0.5、1.0、5.0、10.0 ml）、 容量瓶（50、100、500、1000ml）、量筒（100、500、1000ml）、烧杯（100、500、1000ml）、 培养皿、玻璃棒、滴瓶、吸球、白大褂、帽子、胶皮手套（手术用）、口罩、火柴、脱脂棉、 称量纸、不锈钢药勺 4 药品及试剂：药品（见培养基配制表）；75%酒精 三、实验方法 1 培养基母液的配置 配制培养基前先要配制母液。母液分大量元素、微量元素、铁盐及有 机物质四类。各类成分、浓度、用量见表 9。 2 培养基的配置与分装 ① 取 1000ml 烧杯，先加入 600 ml 左右的蒸馏水，然后分别加入大量元素 10 倍母液 100 ml， 微量元素 100 倍母液 10 ml，铁盐 100 倍母液 10 ml，有机物质 100 倍母液 10 ml。此外，根 据培养材料和不同培养阶段还要加入一定量的生长激素类（如马铃薯在增殖阶段加入 0.5mg/L 的细胞分裂素类物质卞基嘌呤（6-BA）有利于茎叶分化，生根阶段加入 0.1～0.5mg/L 的生长素类萘乙酸（NAA）有利于生根。然后将混合液倒入量筒，用蒸馏水定溶至 1000 ml。 ② 将定溶后的溶液倒入锅内，加白糖 30g（糖浓度 3%），溶化。 ③ 调节 PH 值，用 1mol/L 的 NaOH 或 HCl 调节酸碱度为 PH5.8。 ④ 加入琼脂粉 6g，（0.6%）放在电磁炉上，煮沸融化。 ⑤ 培养基的分装，每个培养瓶内装 60 ml，分装时要避免把培养基倒在瓶口上，否则培养

时容易引起杂菌污染。③封口，用封口膜盖好瓶口后，再用线绳系好。表9S培养基母液配制表（单位：mg）母液体积配培养基吸取量类别成分规定量称取量扩大倍数(ml)(ml/l)KNO3190019000NHANO;165016500大量3703700100010MgSO47H20100元素1700KH2PO41704404400CaCl24H20MnSO44H2022.32230ZnSO047H208.68606.2620H;BO3微量100KI0.8383100010元素0.2525Na2Mo042H200.025CuSO45H02.52.5CoCl26H200.025Na2-EDTA37.253725铁盐100010010FeS047H2027.8527852.0100甘氨酸200.4硫氨酸有机100吡哆素0.52550010物质25烟酸0.5肌醇10050003培养基的灭菌把装好培养基的培养瓶放入高压灭菌锅中，盖好锅盖，关闭放气阀和安全阀，接通电源，进行加温，当锅内压力升至0.5kg/cm2时，打开排气阀放气5min，排出锅内的冷空气。然后关闭排气阀，压力继续上升至1.1kg/cm2时，锅内温度可达120℃，保持15～20min后，断开电源。待灭菌锅自然冷却后，取出培养瓶，凝固备用。4其他器具的灭菌镊子、解剖刀、解剖剪、培养皿等可用干热灭菌法。将清洗晾干后的器皿和器具用牛皮纸包好，放进电热烘干箱。当温度升至100℃时，启动箱内鼓风机，意识电热箱内的温度均匀。当温度升至160℃时，定时2h，即可达到灭菌目的。5移植无菌操作20min前将超净工作台的紫外灯打开照射灭菌，同时使超净工作台处于9

9 时容易引起杂菌污染。 ⑥ 封口，用封口膜盖好瓶口后，再用线绳系好。 表 9 S 培养基母液配制 表 （单位：mg） 类别 成分 规定量 称取量 母液体积 （ml） 扩大倍数 配培养基吸取量 （ml/l） 大 量 元素 KNO3 NH4NO3 MgSO47H20 KH2PO4 CaCl24H2O 1900 1650 370 170 440 19000 16500 3700 1700 4400 1000 10 100 微 量 元素 MnSO44H2O ZnSO47H2O H3BO3 KI Na2MoO42H2O CuSO45H2O CoCl26H2O 22.3 8.6 6.2 0.83 0.25 0.025 0.025 2230 860 620 83 25 2.5 2.5 1000 100 10 铁盐 Na2-EDTA FeSO47H2O 37.25 27.85 3725 2785 1000 100 10 有 机 物质 甘氨酸 硫氨酸 吡哆素 烟酸 肌醇 2.0 0.4 0.5 0.5 100 100 20 25 25 5000 500 100 10 3 培养基的灭菌 把装好培养基的培养瓶放入高压灭菌锅中，盖好锅盖，关闭放气阀和安全 阀，接通电源，进行加温，当锅内压力升至 0.5kg/cm2 时，打开排气阀放气 5min，排出锅内 的冷空气。然后关闭排气阀，压力继续上升至 1.1 kg/cm2 时，锅内温度可达 120℃，保持 15～ 20 min 后，断开电源。待灭菌锅自然冷却后，取出培养瓶，凝固备用。 4 其他器具的灭菌 镊子、解剖刀、解剖剪、培养皿等可用干热灭菌法。将清洗晾干后的器 皿和器具用牛皮纸包好，放进电热烘干箱。当温度升至 100℃时，启动箱内鼓风机，意识电 热箱内的温度均匀。当温度升至 160℃时，定时 2h，即可达到灭菌目的。 5 移植 无菌操作 20 min 前将超净工作台的紫外灯打开照射灭菌，同时使超净工作台处于

工作状态，让过滤空气吹拂工作台面和四周台壁。工作人员用肥皂洗手，穿上白大褂，戴上口罩、帽子和手套。操作前将超净工作台紫外灯关闭，用浸泡过75%酒精的脱脂棉擦拭工作台面、手臂和培养瓶外壁。点燃酒精灯，把灭菌后的镊子、解剖刀、解剖剪、插入盛有75%酒精的广口瓶中。移植时，先用酒精灯火焰烧镊子等用具，然后在火焰附近打开培养瓶封口膜，烧瓶口后将瓶内的组培苗取出，放入灭菌后的培养皿中，分割后移植于新配制的培养基上。整个移植过程都应在火焰附近，严格无菌条件下进行，稍有不慎就会造成杂菌污染。6培养与观察移植完毕后，将培养瓶放置于25土2℃的培养箱或培养室内，一般光照8～10h，光照强度3000Lx左右。定期进行观察。7主要环境参数测定定期测定培养室的温度、湿度、气流、光照等环境参数。各种环境参数的测试方法见仪器说明使用书。四、作业完成实验报告，并提出合理化建议。10

10 工作状态，让过滤空气吹拂工作台面和四周台壁。工作人员用肥皂洗手，穿上白大褂，戴上 口罩、帽子和手套。操作前将超净工作台紫外灯关闭，用浸泡过 75%酒精的脱脂棉擦拭工 作台面、手臂和培养瓶外壁。点燃酒精灯，把灭菌后的镊子、解剖刀、解剖剪、插入盛有 75%酒精的广口瓶中。 移植时，先用酒精灯火焰烧镊子等用具，然后在火焰附近打开培养瓶封口膜，烧瓶口后 将瓶内的组培苗取出，放入灭菌后的培养皿中，分割后移植于新配制的培养基上。整个移植 过程都应在火焰附近，严格无菌条件下进行，稍有不慎就会造成杂菌污染。 6 培养与观察 移植完毕后，将培养瓶放置于 25±2℃的培养箱或培养室内，一般光照 8～ 10h，光照强度 3000Lx 左右。定期进行观察。 7 主要环境参数测定 定期测定培养室的温度、湿度、气流、光照等环境参数。各种环境参 数的测试方法见仪器说明使用书。 四、作业 完成实验报告，并提出合理化建议