《生物化学》课程教学课件（讲稿）第二章 酶 第五节 酶活力及酶应用

第一节酶的概念、特点、命名及分类第二节酶的结构与作用机制第三节酶代谢动力学第四节酶的调节第五节酶活力及酶应用

第一节 酶的概念、特点、命名及分类 第二节 酶的结构与作用机制 第三节 酶代谢动力学 第四节 酶的调节 第五节 酶活力及酶应用

第五节酶活力及酶应用酶活力概述一、西酶活力单位酶比活力酶活力测定方法酶的分离纯化酶活力保护纯化步骤的评估酶应用酶工程酶与医学的关系

第五节 酶活力及酶应用 一、酶活力概述 二、酶应用 Ø 酶活力单位 Ø 酶比活力 Ø 酶活力测定方法 Ø 酶的分离纯化 Ø 酶活力保护 Ø 纯化步骤的评估 Ø 酶工程 Ø 酶与医学的关系

一、酶活力酶活力：指酶催化某一化学反应的能力。1、酶活力单位IUBMB酶学委员会于1964年推荐酶活力单位(简称酶单位)每分钟催1个酶活力单位（U）：指在25℃C、最适条件下，化1umol底物反应所需的酶量。ADPCH,OH ATPCH,OPPOCHPOCMg2+OHOHOH磷酸果糖激酶-1OHOHOH6-磷酸果糖1,6-二磷酸果糖为了使酶活力单位符合国际单位制，IUPAC与IUBMB于1972年推荐酶活力单位催量1催量(kat)：指在特定条件下，每秒钟催化1mol底物反应所需的酶量。1U=16.67 X 10-9kat

酶活力：指酶催化某一化学反应的能力。 1、酶活力单位 IUBMB酶学委员会于1964年推荐酶活力单位 （简称酶单位) 1U=16.67×10 -9kat。 一 、酶活力 Ø 1催量（kat)：指在特定条件下，每秒钟催化1mol底物 反应所需的酶量。 为了使酶活力单位符合国际单位制，IUPAC与IUBMB于1972年推 荐酶活力单位催量。 Ø 1个酶活力单位(U)：指在25℃、最适条件下，每分钟催 化1μmol底物反应所需的酶量

2、比活力定义：每毫克酶蛋白所具有的酶活力。单位：U/mg蛋白质有时用每克酶制剂或每毫升酶制剂含有多少个活力单位表示。意义：酶的比活力是分析酶的纯度是重要指标比活力越高，表明样品纯度越大

2、比活力 定义：每毫克酶蛋白所具有的酶活力。 单位：U/mg蛋白质。 有时用每克酶制剂或每毫升酶制剂含有多少个活 力单位表示。 意义：酶的比活力是分析酶的纯度是重要指标。 比活力越高，表明样品纯度越大

3、酶活力测定方法酶活力的测定实际上就是测定不同时刻底物的量或产物的量，即根据底物或产物的物理或化学特性，采用特定的方法测定不同时刻某一种底物或产物的数量或浓度。一）终点法：测反应完成所需要的时间(二）动力学方法1.分光光度法2.滴定法3.酶偶联分析法4.电化学法乙醇脱氢酶>乙醛+NADH+H+乙醇+NAD+

（一）终点法： 测反应完成所需要的时间 （二）动力学方法 1.分光光度法 2.滴定法 3.酶偶联分析法 4.电化学法 . 酶活力的测定实际上就是测定不同时刻底物的量或产物的 量，即根据底物或产物的物理或化学特性，采用特定的方 法测定不同时刻某一种底物或产物的数量或浓度。 3、酶活力测定方法

乙醇脱氢酶>乙醛+NADH+H+乙醇+NAD+340nm肌酸激酶肌酸+ATP石磷酸肌酸+ADP+H+指示剂：百里酚蓝597nm

乙醇 + NAD+ 乙醛 + NADH + H+ 乙醇脱氢酶 340 nm 肌酸 + ATP 磷酸肌酸 + ADP + H+ 肌酸激酶 指示剂： 百里酚蓝 597 nm

4、酶的分离纯化因为绝大多数酶是蛋白质，因此酶的分离纯化就是蛋白质的分离纯化具体过程：选材－破碎－提取－分离纯化-酶活性测定

4、酶的分离纯化 因为绝大多数酶是蛋白质，因此酶的分离纯化就 是蛋白质的分离纯化 具体过程： 选材－破碎－提取－分离纯化-酶活性测定

破碎表4-1细胞破碎方法及原理分类细胞破碎方法+细胞破碎原理捣碎法研磨法机械破碎法通过机械运动产生的剪切力，使组织、细胞破碎，匀浆法?温度差破碎法+通过各种物理因索的作用，使组织、细胞的外层结物理破碎法压力差破碎法+构破坏，从而使细胞破碎超声波破碎法+添加有机溶剂+化学破碎法通过各种化学试剂对细胞膜的作用，使细胞破碎，添加表面活性剂+自溶法通过细胞本身的酶系或外加酶制剂的催化作用，使酶促破碎法+外加酶制剂法+细胞外层结构破坏，而使细胞破碎（引自《酶工程》P96.郭勇.科学出版社.2005.8）

破碎

提取表4-2酶的主要提取方法+提取方法+用于提取的溶剂提取的酶的性质盐溶液提取0.02~0.5mo1/L的盐溶液+在低盐溶液中溶解度较大的酶酸溶液提取pH2~6的水溶液+在稀酸溶液中溶解度较大且稳定性较好的酶碱溶液提取pH8~12的水溶液在稀碱溶液中溶解度较大且稳定性较好的酶有机溶液提取可与水混溶的有机溶剂与脂类结合或含较多非极性基团的酶引自《酶工程》P99.郭勇.科学出版社.2005.8）

提取

分离-过滤法表4-4过滤的种类及特性类别截留的颗粒大小过滤介质截留的主要物质滤纸、滤布、纤维、多空酵母、霉菌、动物细胞、植物细胞粗滤>2μme陶瓷固形物等微滤细菌、灰尘等+微过滤、微孔陶瓷0.2~2μm超滤+20A至2μm超滤膜?病毒、生物大分子等<20A反渗透反渗透膜生物小分子、盐、离子等（引自《酶工程》P101.郭勇.科学出版社.2005.8）

分离-过滤法