《生物化学》课程教学课件（讲稿）第一章 蛋白质（5/6）第六节 蛋白质的性质和含量测定

第一节蛋白质的生物学功能和分类第二节蛋白质组成单位氨基酸肽第三节第四节蛋白质的结构第五节蛋白质结构与功能的关系第六节蛋白质的性质第七节蛋白质的分离纯化

第一节 蛋白质的生物学功能和分类 第二节 蛋白质组成单位氨基酸 第三节 肽 第四节 蛋白质的结构 第五节 蛋白质结构与功能的关系 第六节 蛋白质的性质 第七节 蛋白质的分离纯化

第六节蛋白质的性质和含量测定

第六节 蛋白质的性质和含量测定

COO-蛋白质分子量H.N-C-H蛋白质的紫外吸收R(三)两性解离与等电点（四）胶体性质（五）蛋白质的变性和复性β,二（六）蛋白质的沉淀(七)显色反应

（一）蛋白质分子量 （二）蛋白质的紫外吸收 （三）两性解离与等电点 （四）胶体性质 （五）蛋白质的变性和复性 （六）蛋白质的沉淀 （七）显色反应

蛋白质分子量()蛋白质相对分子量在10000~1000000D之间。道尔顿(Dalton)在生物化学经常用D或kD表示，是将分子中所有原子按个数求原子量的代数和。定义为碳12原子质量的1/12蛋白质分子量220.000肌球蛋白[myosin]165,000甲状腺球蛋白[thyroglobulin]130.000β-半乳糖苷酶[β-galactosidase]100.000副肌球蛋白[paramyosin]94,000磷酸化酶a[phosphorylasea]68,000血清白蛋白[serumalbumin]

蛋白质相对分子量在10 000~1 000 000D之间。 道尔顿(Dalton)在生物化学经常用D或kD表示，是将分子中所有 原子按个数求原子量的代数和。定义为碳12原子质量的1/12。 （一）蛋白质分子量

测定蛋白质分子相对质量的方法有哪些？1.根据分子组成测定最低相对分子质量（最常用）2.SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法3.凝胶过滤法4.渗透压法5.沉降法：超速离心6.数据库查询

测定蛋白质分子相对质 量的方法有哪些？ 1. 根据分子组成测定最低相对分子质量 2. SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法 (最常用) 3. 凝胶过滤法 4. 渗透压法 5. 沉降法：超速离心 6. 数据库查询

1.根据分子组成测定最小分子量测定某一微量元素或某一氨氢基酸的含量如铁原子或色氢酸，并假设蛋白质分子中只有一个铁原子或一个色氨酸，进行计算如肌红蛋白含0.335%的铁蛋白分子量多少？n=m/M0.335/55.8=100/x（实为16900）最小M=55.8×100/0.335=16700牛血清白蛋白含Trp0.58%最低M=35200D，实际为69000D，含2个Trp

1.根据分子组成测定最小分子量 测定某一微量元素或某一氨基酸的含量如铁原子或色氨酸，并 假设蛋白质分子中只有一个铁原子或一个色氨酸，进行计算 牛血清白蛋白含Trp 0.58% 最低M=35200D，实际为69000D，含2个Trp 最小M＝55.8×100/0.335=16700 (实为16900) 如肌红蛋白含0.335%的铁 n=m/M 0.335/55.8=100/x 蛋白分子量多少？

2. SDS一PAGE（最常用(十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳）kDa180(kDa)14039100-加入SDS和少量统75.基乙醇，则电泳4060-迁移率主要取决2845-于其相对分子质35.18量，而与电荷和分子形状无关。25.13.515-8.510-

2. SDS—PAGE (最常用) （十二烷基硫酸钠——聚丙烯酰胺凝胶电泳） 加入SDS和少量巯 基乙醇，则电泳 迁移率主要取决 于其相对分子质 量，而与电荷和 分子形状无关

>影响迁移率的主要因素凝胶：凝胶的分子筛效应对长短不同的棒形分子会产生不同的阻力(主要因素)；凝胶的浓度和交联度待分离物质性质：同一电泳条件下，相对分子质量小者，迁移率大。相对分子质量大者，迁移率小>优点：快速，样品用量少，可同时测几个样品>缺点：误差大，约为±10%（误差主要来源于迁移距离的测量误差）lgMr=k-bmMr:相对分子质量；k为常数；b:斜率；m:迁移率先用标准蛋白lMr与m做出标曲，再计算目标蛋白质大小

Ø 优点：快速，样品用量少，可同时测几个样品 Ø 缺点：误差大，约为±10％（误差主要来源于迁移距 离的测量误差） Ø 影响迁移率的主要因素 • 凝胶：凝胶的分子筛效应对长短不同的棒形分子会产 生不同的阻力(主要因素)；凝胶的浓度和交联度 • 待分离物质性质：同一电泳条件下，相对分子质量小 者，迁移率大。相对分子质量大者，迁移率小 lgMr=k-bm Mr: 相对分子质量； k为常数； b: 斜率； m: 迁移率。 先用标准蛋白lgMr与m做出标曲，再计算目标蛋白质大小

3、葡聚糖凝胶过滤法分析蛋白质分子量b55.0相对分子质量的对数与福士长所洗脱体积呈线性关系先用标准蛋白lgMr与洗脱体积做出标曲，再BA67000100000国计算目标蛋白质大小。GOO洗税体(ml）89洗说体与分子冠的关系图

3、 葡聚糖凝胶过滤法分析蛋白质分子量 Ø 相对分子质量的对数与 洗脱体积呈线性关系。 Ø 先用标准蛋白lgMr与 洗脱体积做出标曲，再 计算目标蛋白质大小

优点：简单、准4.根据蛋白质的渗透确、且不受蛋白压测蛋白质分子量质分子的形状和水化程度影响用半透膜将蛋白质溶液与纯水不足：受pH的影隔开，当渗透压达平衡时，测响，不能区别溶定其渗透压，计算分子量：液中蛋白质分子渗透压是否均一。RTMr =lim元一溶剂蛋自质溶液c→0C半透膜C：浓度 (克/升)T：绝对温度（开氏温度）图7-1渗透压测定的示意图元：以大气压表示的渗透压R：气体常数（0.082升/大气压/克分子/K开氏温度）

4. 根据蛋白质的渗透 压测蛋白质分子量 用半透膜将蛋白质溶液与纯水 隔开，当渗透压达平衡时，测 定其渗透压，计算分子量： c c R T Mr p 0 lim ® = C：浓度（克/升） T：绝对温度（开氏温度） p：以大气压表示的渗透压 R：气体常数（0.082升/大气压/克分子/K开氏温度） 优点：简单、准 确、且不受蛋白 质分子的形状和 水化程度影响 不足：受pH的影 响，不能区别溶 液中蛋白质分子 是否均一