《生物化学》课程教学课件（讲稿）第一章 蛋白质（6/6）第七节 蛋白质的分离纯化

第一节蛋白质的生物学功能和分类第二节蛋白质组成单位氨基酸肽第三节第四节蛋白质的结构第五节蛋白质结构与功能的关系第六节蛋白质的性质第七节蛋白质的分离纯化

第一节 蛋白质的生物学功能和分类 第二节 蛋白质组成单位氨基酸 第三节 肽 第四节 蛋白质的结构 第五节 蛋白质结构与功能的关系 第六节 蛋白质的性质 第七节 蛋白质的分离纯化

第七节蛋白质的分离纯化

第七节 蛋白质的分离纯化

蛋白质的结构决定其功能研究蛋白质的结构和功能结构改变可导致功能的改变疾病分离纯化得到蛋白质

蛋白质的结构决定其功能 结构改变可导致功能的改变 疾病 分离纯化得到蛋白质 研究蛋白质的 结构和功能

机体器官组织蛋白质分离、提取和纯化细胞蛋白质混合物蛋白质SugarGlycoproteinchainProteins

蛋白质分离纯化基本技术路线微生物、动物或植物细胞细胞破碎发酵液或细胞培养液初分离和细分离蛋白提取，沉淀分离离心分离，过滤分离，层析分离，电泳分离，萃取分离蛋白分离纯化结晶分离等。蛋白浓缩结晶等冷冻干燥、蛋白分析或处理特征参数研究、酶分子修饰、固定化蛋白贮存

蛋白质分离纯化基本技术路线 细胞破碎 蛋白提取 蛋白分离纯化 蛋白浓缩 蛋白贮存 微生物、动物或植物细胞 发酵液或细胞培养液 蛋白分析或处理 离心分离，过滤分离，沉淀分离， 层析分离，电泳分离，萃取分离， 结晶分离等。 冷冻干燥、结晶等 特征参数研究、酶分子修饰、固定化 初 分 离 和 细 分 离

一细胞破碎许多酶存在于细胞内。为了提取这些胞细胞破碎内蛋白，首先需要对细胞进行破碎处理蛋白提取1蛋白分离纯化1）机械破碎1蛋白浓缩2）物理破碎13）化学破碎蛋白分析或处理4）酶解破碎蛋白贮存

许多酶存在于细胞内。为了提取这些胞 内蛋白，首先需要对细胞进行破碎处理。 1）机械破碎 2）物理破碎 3）化学破碎 4）酶解破碎 一 细胞破碎

2 常见的细胞破碎仪器高压细胞破碎机组织捣碎机JY92-IID超声波细胞破碎珠玻璃研钵DY89-1型电动玻璃匀浆机

JY92-II D超声波 细 胞 破 碎 珠 高 压 细 胞 破 碎 机 DY89-I型 电动玻璃匀浆机 2 常见的细胞破碎仪器 组织捣碎机 玻璃研钵

细胞破碎方法的选择>动物细胞比较容易破碎，通过一般的研磨器、匀浆器、捣碎机等可达到目的>细菌细胞壁较厚，破碎需要用超声波、细菌磨、溶菌酶、某些化学溶剂（如甲苯、去氧胆酸纳）或冻融等处理>植物细胞因与细菌一样具有细胞壁，所以它们的破壁方法与细菌的破壁方法类似

细胞破碎方法的选择： Ø 动物细胞比较容易破碎，通过一般的研磨器、匀浆 器、捣碎机等可达到目的 Ø 细菌细胞壁较厚，破碎需要用超声波、细菌磨、溶 菌酶、某些化学溶剂（如甲苯、去氧胆酸纳）或冻 融等处理 Ø 植物细胞因与细菌一样具有细胞壁，所以它们的破 壁方法与细菌的破壁方法类似

细胞结构与酶分布PlantCell StructureCellwallChloroplastsPlasma,Plasmo-membranedesmataCentralvacuoleMitochondrionLysosomeBacterialCellStructureRibosomesGolgiNuclearPiliapparatusDNAenvelopeNucleus-RoughRibosomesendoplasmicNucleolusreticulumSmoothendoplasmicCytoplasmFlagellumreticulumAnimalCellStructureMicrovilliGolgiCapsuleapparatusPlasmamembraneCell wallCytoskeletonPlasmaCentrioleSmoothmembrane,Lysosomeendoplasmicreticulum-RibosomesNuclearenvelope-Mitochon-drionNucleolusRoughendo-plasmicreticulumNucleusCytoplasm

细胞结构与酶分布

二 蛋白提取提取使用的溶提取对象细胞破碎方法剂或溶液盐溶液0.02 ~用于提取在低浓度盐溶液蛋白提取提取0.5mol/L中溶解度较大的蛋白的盐溶液蛋白分离纯化酸溶液pH2 ~ 6用于提取在稀酸溶液中溶真提取的水溶液解度大，且稳定性较好的蛋白蛋白浓缩碱溶液+pH8 ~ 12用于提取在稀碱溶液中溶提取的水溶液解度大且稳定性较好的蛋蛋白分析或处理白★有机溶可与水混用于提取那些与脂质结合蛋白贮存剂提取溶的有机牢固或含有较多非极性基溶剂团的蛋白

提取 方法 使用的溶 剂或溶液 提取对象 盐溶液 提取 0.02～ 0.5mol/L 的盐溶液 用于提取在低浓度盐溶液 中溶解度较大的蛋白 酸溶液 提取 pH2～6 的水溶液 用于提取在稀酸溶液中溶 解度大，且稳定性较好的 蛋白 碱溶液 提取 pH8～12 的水溶液 用于提取在稀碱溶液中溶 解度大且稳定性较好的蛋 白 有机溶 剂提取 可与水混 溶的有机 溶剂 用于提取那些与脂质结合 牢固或含有较多非极性基 团的蛋白 二 蛋白提取