复旦大学：《药物分析实验》课程教学资源（实验课件）实验4 内标法测定血浆中氧氟沙星含量（内标法）

高效液相色谱法测定血浆中 氧氟沙星含量（内标法）

高效液相色谱法测定血浆中 氧氟沙星含量（内标法）

、实验目的 ■掌握高效液相色谱法的分离原理、仪器构件及 使用方法。 ■掌握生物样品前处理技术之液液提取法。 ■掌握内标一点定量法

一、实验目的  掌握高效液相色谱法的分离原理、仪器构件及 使用方法。  掌握生物样品前处理技术之液液提取法。  掌握内标一点定量法

实验原理 输液系统 进样和分离 检测系统 系统 数据处理和显 示系统 高压泵、进样器、色谱柱、检测器、数据处 理器和显示器

二、实验原理 高压泵、进样器、色谱柱、检测器、数据处 理器和显示器 输液系统 进样和分离 系统 检测系统 数据处理和显 示系统

常用术语 操作 部分 >脱气（排除系统中的气泡） >平衡（活化柱子） 》按方法开始实验 >冲洗柱子（防止柱子堵塞） >Standby,/Off(实验结束后停止)

www.themegallery.com L O G O 常用术语  脱气（排除系统中的气泡）  平衡（活化柱子）  按方法开始实验  冲洗柱子（防止柱子堵塞）  Standby/Off（实验结束后停止） 操作 部分 4

常用术语 溶剂箱 溶剂箱 分析物信号走向 真空脱气机 直空税气机 泵 自动进样器 予持腔制器 计算机工作站 自动进样指 柱温箱 检测器 测带

www.themegallery.com L O G O 常用术语 计算机工作站 分析物信号走向 溶剂箱 真空脱气机 泵 自动进样器 柱温箱 检测器 5

www.themegallery.com LOGO 手动进样器 >进样针置于注射位 置，进样时扳至 Ioad位置，进样后 LOAD 扳于inject位置5秒 后，再取下进样器 >不用时处于inject 位置 6

www.themegallery.com L O G O 手动进样器  进样针置于注射位 置，进样时扳至 load位置，进样后 扳于inject位置5秒 后，再取下进样器  不用时处于inject 位置 6

DAtA:VCHEN3\2014-05-23 11-24-381001-0101.B new std 样品名 Acq.operator ly Seq.Line I 样品位置 Acq.Instrument Instrume Location vial 1 Injection Date :5/27/2111:24: In o1me:20.01 EM32 文件名称 2311-24-38120140513 :5 2014 HEM32\1\METHODS\DEF LC.M 0143:1811PMby1y 进样量 D1A S0-2604 .10020143001101 01 检测波长 方法名称 色谱图 对乙酰氨基酚 非那西丁（内标） Area Percent Report signal 1.000d Dilution: 1.0000 Use Multiplier Dilution Factor with IsTDs Signal 1:DADI A,sig=260,4 Ret-360,100 Peak RetTime Type width Area [nin] 【minl[mAU*s] [mAU】 保留时间 峰面积 692,09418 70.2613150,100 Totals 1391,29898181,90266

www.themegallery.com L O G O 样品名 进样量 色谱图 保留时间 峰面积 样品位置 检测波长 方法名称 文件名称 对乙酰氨基酚 非那西丁（内标） 7

生物样品前处理 液液提取（有机溶剂提取法） A.目的：一次即可除去大部分杂质 B.有机溶剂的特性：对被测组分的溶解度大：沸点低，易于 浓集、挥散；与水不相混溶、化学稳定、不易乳化等。最 常用的溶剂是乙醚、氯仿和乙酸乙酯等。 C.有机溶剂相和水相的体积：一般有机相与水相（体液样品） 容积比1：1或2~5：1。 D.水相的pH值：生物样品宜在碱性或近中性提取，生物基质 中内源性物质多为酸性，在碱性下不易被萃取出来

生物样品前处理 A.目的：一次即可除去大部分杂质 B. 有机溶剂的特性：对被测组分的溶解度大：沸点低，易于 浓集、挥散；与水不相混溶、化学稳定、不易乳化等。最 常用的溶剂是乙醚、氯仿和乙酸乙酯等。 C.有机溶剂相和水相的体积：一般有机相与水相（体液样品） 容积比1:1或2～5:1。 D.水相的pH值：生物样品宜在碱性或近中性提取，生物基质 中内源性物质多为酸性，在碱性下不易被萃取出来 液液提取（有机溶剂提取法）

内标法测定生物样品中药物含量 内标法优点： 进样量不超量时，重复性及操作条件对结果无影响 只需待测组分和内标物出峰，与其他组分是否出峰无关， 适合测定微量组分，分为工作曲线法和内标一点法； 内标法缺点： 制样要求高；找合适内标物相对因难

内标法优点： 进样量不超量时，重复性及操作条件对结果无影响 只需待测组分和内标物出峰，与其他组分是否出峰无关, 适合测定微量组分，分为工作曲线法和内标一点法； 内标法缺点： 制样要求高；找合适内标物相对困难。 内标法测定生物样品中药物含量

内标法测定生物样品中药物含量 内标物的选择 ■对内标物要求： 内标物须为原样品中不含组分； 内标物与待测物保留时间应接近且R>1.5; 内标物为高纯度标准物质，或含量已知物质

 对内标物要求： 内标物须为原样品中不含组分； 内标物与待测物保留时间应接近且R>1.5； 内标物为高纯度标准物质，或含量已知物质。 内标物的选择 内标法测定生物样品中药物含量