《食品微生物学》课程教学资源（思考与练习）食品微生物学实验思考题及答案

实验一显微镜的使用和细菌简单染色1.用油镜观察时应注意哪些问题？由于油浸镜的工作距离很短（0.19mm左右），故使用时必须特别小心。在低倍镜找到要观察的部位以后将镜筒升起，在标本上加一滴香柏油，转换油镜头，从侧面注视，用粗调螺旋将镜筒小心下降，使油镜头浸入油滴，直到几乎与标本接触为止（注意切勿压在标本上，以免压碎玻片，甚至损坏环油镜头）。从目镜观察先用粗调螺旋徐徐升起（只准上升镜筒，不能向下调节），当视野中有模糊的标本物像时，改用细调螺旋调节直到标本物像清晰为止，如转动粗调螺旋已使镜头离开油镜，应重新调节，直至调到看清物像为止。2.什么是物镜的同焦现象？一般情况下，当五项在一种物镜中已清晰聚焦后，转动转换器将其它物镜工作时，物像基本保持在聚焦状态。实验二革兰氏染色法1.哪些环节会影响革兰氏染色结果的正确性？其中最关键的环节是什么？菌龄、图片厚度、染色均匀度、脱色时间、脱色均匀度等。其中脱色时间是关键。2.革兰氏染色时，为什么特别强调菌龄不能太老？为什么？菌龄太老，其中的部分细胞可能已经死亡或自溶，造成细胞壁的通透性增强，染色结果可能出现假阴性。3.革兰氏染色时，初染前能加碘液吗？不能。初染前加碘液的话就会先和染料结合成大分子，使得染料分子不能穿过细胞壁进入细胞质膜，达不到初染效果。4.不经过复染，能否区别革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌？可以。因为脱色后G+是紫色的而G-是无色的，所以已经可以区分了。但是如果不经复染的话，镜检时看不清G-的细胞形态。5.制备细菌染色标本时，应该注意哪些环节？涂片、固定、脱色6.为什么要求制片完全干燥后才能用油镜观察？因为如果制片和油镜镜头之间有水层，透过载玻片的光线就会发生折射而不能完全进入镜头，从而降低视野的亮度；另外，由于水层的折射，会降低显微镜的分辨率，造成图像不清晰。7.如果图片未经热固定会出现什么问题？加热温度过高、时间过长又会怎样？

实验一 显微镜的使用和细菌简单染色 1.用油镜观察时应注意哪些问题？ 由于油浸镜的工作距离很短(0.19mm 左右)，故使用时必须特别小心。在低倍镜找到要观察的部位以后， 将镜筒升起，在标本上加一滴香柏油，转换油镜头，从侧面注视，用粗调螺旋将镜筒小心下降，使油镜头浸 入油滴，直到几乎与标本接触为止(注意切勿压在标本上，以免压碎玻片，甚至损坏油镜头)。从目镜观察， 先用粗调螺旋徐徐升起(只准上升镜筒，不能向下调节)，当视野中有模糊的标本物像时，改用细调螺旋调节， 直到标本物像清晰为止，如转动粗调螺旋已使镜头离开油镜，应重新调节，直至调到看清物像为止。 2.什么是物镜的同焦现象？ 一般情况下，当五项在一种物镜中已清晰聚焦后，转动转换器将其它物镜工作时，物像基本保持在聚焦 状态。 实验二 革兰氏染色法 1. 哪些环节会影响革兰氏染色结果的正确性？其中最关键的环节是什么？ 菌龄、图片厚度、染色均匀度、脱色时间、脱色均匀度等。其中脱色时间是关键。 2. 革兰氏染色时，为什么特别强调菌龄不能太老？为什么？ 菌龄太老，其中的部分细胞可能已经死亡或自溶，造成细胞壁的通透性增强，染色结果可能出现假阴性。 3. 革兰氏染色时，初染前能加碘液吗？ 不能。初染前加碘液的话就会先和染料结合成大分子，使得染料分子不能穿过细胞壁进入细胞质膜，达 不到初染效果。 4. 不经过复染，能否区别革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌？ 可以。因为脱色后 G+是紫色的而 G-是无色的，所以已经可以区分了。但是如果不经复染的话，镜检时看 不清 G-的细胞形态。 5. 制备细菌染色标本时，应该注意哪些环节？ 涂片、固定、脱色 6. 为什么要求制片完全干燥后才能用油镜观察？ 因为如果制片和油镜镜头之间有水层，透过载玻片的光线就会发生折射而不能完全进入镜头，从而 降低视野的亮度；另外，由于水层的折射，会降低显微镜的分辨率，造成图像不清晰。 7. 如果图片未经热固定会出现什么问题？加热温度过高、时间过长又会怎样？

实验四放线菌、酵母菌、霉菌形态观察1.酵母菌死活细胞观察中，美兰液有何作用？美兰的氧化态为蓝色，还原态为无色。活细胞由于新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力。因此活细胞为无色，死或衰老细胞呈蓝色。2.为何要用乳酸-石碳酸溶液作霉菌的水浸片？霉菌菌丝较粗，易收缩变形，而且孢子很容易分散。乳酸石碳酸溶液能使细胞不变形，具有防腐杀菌的作用，能保持较长时间不干燥，本身呈蓝色，具有一定的染色效果。实验五微生物大小的测定和显微镜直接计数1．为什么随放大倍数的改变，目镜测微尺的每格相对的长度也会改变？能找出这种变化的规律吗？因为随着放大倍数的改变，被观察的物体被放大，而目镜测微尺在目镜中，没有被放大。放大倍数增加几倍，目镜测微尺的每格相对的长度就缩小几倍。2.能否用血球计数板在油镜下进行计数？为什么？不能。计数时滴在血球计数板上的是菌悬液，相当于在镜头和计数板直接加了一层水。水层会降低视野的亮度和显微镜的分辨率，造成图像不清晰。实验六食品中细菌总数的测定1.食品中检出的细菌总数是否代表食品上的所有细菌数？为什么？不能。菌落总数只能代表需要菌的数量。食品中的厌氧细菌在该条件下不能生长出菌落。2.判断题1.实验室通常使用血球计数板测细菌的总数。（F）2.浸油的油镜头可用软的卫生纸擦净。（F）3.为了节省时间，可直接在染色涂片上滴加香柏油后，直接用油镜观察。（F）4.做稀释平板测数时，每做一个稀释度都必须更换一支无菌吸管。（T）5.实验室做固体培养基，常加2%的琼脂作凝固剂。（T）6.大肠杆菌经革兰氏染色后，菌体呈红色，它是革兰氏阴性细菌。（T）7.使用手提灭菌锅灭菌后，为了尽快排除锅内蒸汽，可直接打开排气阀排气。（F）8.镜台测微尺每小格的实际长度是10微米。（T）

实验四 放线菌、酵母菌、霉菌形态观察 1．酵母菌死活细胞观察中，美兰液有何作用？ 美兰的氧化态为蓝色，还原态为无色。活细胞由于新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力。因此活 细胞为无色，死或衰老细胞呈蓝色。 2. 为何要用乳酸-石碳酸溶液作霉菌的水浸片？ 霉菌菌丝较粗，易收缩变形，而且孢子很容易分散。乳酸石碳酸溶液能使细胞不变形，具有防腐杀菌的 作用，能保持较长时间不干燥，本身呈蓝色，具有一定的染色效果。 实验五 微生物大小的测定和显微镜直接计数 1．为什么随放大倍数的改变，目镜测微尺的每格相对的长度也会改变？能找出这种变化的规律吗？ 因为随着放大倍数的改变，被观察的物体被放大，而目镜测微尺在目镜中，没有被放大。放大倍数增加 几倍，目镜测微尺的每格相对的长度就缩小几倍。 2.能否用血球计数板在油镜下进行计数？为什么？ 不能。计数时滴在血球计数板上的是菌悬液，相当于在镜头和计数板直接加了一层水。水层会降低视 野的亮度和显微镜的分辨率，造成图像不清晰。 实验六 食品中细菌总数的测定 1. 食品中检出的细菌总数是否代表食品上的所有细菌数？为什么？ 不能。菌落总数只能代表需要菌的数量。食品中的厌氧细菌在该条件下不能生长出菌落。 2. 判断题 1. 实验室通常使用血球计数板测细菌的总数。（F） 2. 浸油的油镜头可用软的卫生纸擦净。 （F） 3. 为了节省时间，可直接在染色涂片上滴加香柏油后, 直接用油镜观察。（F） 4. 做稀释平板测数时，每做一个稀释度都必须更换一支无菌吸管。（T） 5. 实验室做固体培养基，常加 2%的琼脂作凝固剂。（T） 6. 大肠杆菌经革兰氏染色后，菌体呈红色，它是革兰氏阴性细菌。（T） 7. 使用手提灭菌锅灭菌后，为了尽快排除锅内蒸汽，可直接打开排气阀排气。 （F） 8. 镜台测微尺每小格的实际长度是 10 微米。（T）

9.通常酵母菌培养温度为28-30℃。（T）10．目镜测微尺每小格的实际长度是10μm。(F)11．目镜测微尺每格的实际长度是未知的，需用镜台测微尺校正。（T）12.镜台测微尺每格的实际长度是未知的，需用目镜测微尺校正。（F）13.通常霉菌的培养温度为28-30℃。（T）(T)14.血球计数板计数区每小格的体积是1/4000mm。15．血球计数板计数区共有400个小格，每小格的面积是1/400cm2。（F）16.通常细菌培养温度为37℃。（T）

9. 通常酵母菌培养温度为 28-30℃。 （T） 10. 目镜测微尺每小格的实际长度是 10μm。 （F） 11. 目镜测微尺每格的实际长度是未知的，需用镜台测微尺校正。（T） 12. 镜台测微尺每格的实际长度是未知的，需用目镜测微尺校正。 （F） 13. 通常霉菌的培养温度为 28-30℃。（T） 14. 血球计数板计数区每小格的体积是 1/4000mm3。 （T） 15. 血球计数板计数区共有 400 个小格，每小格的面积是 1/400cm2 。 （F） 16. 通常细菌培养温度为 37℃。（T）