天津科技大学：《分子生物学》课程教学课件（PPT讲稿）分子生物学实验技术

目 录 实验一、植物染色体DNA的提取及纯度鉴定 实验二、大肠杆菌质粒DNA的提取 实验三、琼脂糖凝胶电泳 实验四、ＤＮＡ的限制性酶切 实验五、大肠杆菌感受态细胞的制备及外源DNA 的转化 实验六、PCR基因扩增技术

目 录 实验一、植物染色体DNA的提取及纯度鉴定 实验二、大肠杆菌质粒DNA的提取 实验三、琼脂糖凝胶电泳 实验四、ＤＮＡ的限制性酶切 实验五、大肠杆菌感受态细胞的制备及外源DNA 的转化 实验六、PCR基因扩增技术

• 实验一、植物染色体DNA的提取 及纯度鉴定

• 实验一、植物染色体DNA的提取 及纯度鉴定

一、实验目的 • 掌握真核植物基因组染色体DNA的一种提 取方法 • 学习使用紫外分光光度法鉴定DNA的纯度， 估计相对含量

一、实验目的 • 掌握真核植物基因组染色体DNA的一种提 取方法 • 学习使用紫外分光光度法鉴定DNA的纯度， 估计相对含量

二、实验原理 • 用低温机械研磨和高浓度、SDS等破坏细 胞壁及膜，使蛋白变性使DNA与蛋白分离， 用一定浓度的溶液将DNA提取出来，用高 浓度乙醇沉淀DNA，氯仿/异戊醇等去除杂 质，RN ase降解核酸，得到纯度较高的 DNA样品。根据核酸与蛋白质分别在 OD260和OD280有吸收峰分别测定之，比 较OD260/OD280比值在1.8附近程度估计 纯度，依据经验公式计算DNA含量

二、实验原理 • 用低温机械研磨和高浓度、SDS等破坏细 胞壁及膜，使蛋白变性使DNA与蛋白分离， 用一定浓度的溶液将DNA提取出来，用高 浓度乙醇沉淀DNA，氯仿/异戊醇等去除杂 质，RN ase降解核酸，得到纯度较高的 DNA样品。根据核酸与蛋白质分别在 OD260和OD280有吸收峰分别测定之，比 较OD260/OD280比值在1.8附近程度估计 纯度，依据经验公式计算DNA含量

三、实验材料与试剂物品 • 1.材料 • 香椿（Toona sinensis）黄花苗

三、实验材料与试剂物品 • 1.材料 • 香椿（Toona sinensis）黄花苗

2、试剂 • 提取缓冲液（预冷） • SSC • RNase液

2、试剂 • 提取缓冲液（预冷） • SSC • RNase液

3、仪器设备 • 高速冷冻离心机（8-316） • 制冰机（8-312） • 紫外可见分光计（8-316） • 冰箱（-86度在8-312，-20度，4度在8-312） • 水浴锅 • 电子天平 • 玻璃仪器等

3、仪器设备 • 高速冷冻离心机（8-316） • 制冰机（8-312） • 紫外可见分光计（8-316） • 冰箱（-86度在8-312，-20度，4度在8-312） • 水浴锅 • 电子天平 • 玻璃仪器等

四、实验操作流程 • 采摘芽苗，洗净→剪小段，擦干表面水分 →放-86度冰箱冻30分钟以上→冰浴研磨匀 浆（分次加提取液）→以下见讲义

四、实验操作流程 • 采摘芽苗，洗净→剪小段，擦干表面水分 →放-86度冰箱冻30分钟以上→冰浴研磨匀 浆（分次加提取液）→以下见讲义

五、结果与处理 • 纯度 • 含量

五、结果与处理 • 纯度 • 含量

• 思考题：影响本实验结果的因素有 哪些，要得到高纯度的DNA需要在 实验中注意哪些问题？

• 思考题：影响本实验结果的因素有 哪些，要得到高纯度的DNA需要在 实验中注意哪些问题？