《微生物学》课程教学课件（PPT讲稿）02 显微与纯培养 第二节 显微镜和显微技术

第二节显微镜和显微技术 几个基本概念： 放大 被观察物越小，放大倍数应越大，否则难以看清！ 分辨率 能辨别两点之间最小距离的能力 反差 被观察物区别于背景的程度 被观察物区别于背景的程度 与显微镜的自身特点有关，但也取决于进行显微观察时对显微 镜的正确使用及良好的标本制作和观察技术，这就是显微技术

第二节 显微镜和显微技术 几个基本概念： 放大 分辨率 反差 被观察物越小，放大倍数应越大，否则难以看清！ 能辨别两点之间最小距离的能力 被观察物区别于背景的程度 被观察物区别于背景的程度 与显微镜的自身特点有关，但也取决于进行显微观察时对显微 镜的正确使用及良好的标本制作和观察技术，这就是显微技术

、显微镜的种类及原理 1.普通光学显微镜 光学显微镜一般配置的最大放大倍数是多少？为什么？ 目镜：10~15×；物镜：100×；总放大倍数1000~1500× 如何实现光学显微镜一般配置的最大放大倍数？其原理？ 使用油镜，即在100×物镜和载玻片之间滴加香柏油；

一、显微镜的种类及原理 1. 普通光学显微镜 光学显微镜一般配置的最大放大倍数是多少？为什么？ 如何实现光学显微镜一般配置的最大放大倍数？其原理？ 目镜：10 ~ 15 ╳；物镜： 100 ╳；总放大倍数1000~1500 ╳； 使用油镜，即在100 ╳物镜和载玻片之间滴加香柏油；

1.普通光学显微镜 0.5 分辨率（最小可分辨距离）= n sin 0 Objective Working distance Slide with specimen θ为物镜镜口角的半数，它取决于物镜的直径和工作距离

1. 普通光学显微镜 0.5 l 分辨率（最小可分辨距离）= ———— n sin q q为物镜镜口角的半数，它取决于物镜的直径和工作距离

1.普通光学显微镜 0.5 分辨率（最小可分辨距离）= nsinθ N: 玻片与物镜间介质的折射率 空气(n=1.0)、水(n=1.33)、香柏油(n=1.52)、玻璃(n=1.54) 显微观察时可根据物镜的特性而选用不同的介质

1. 普通光学显微镜 0.5 l 分辨率（最小可分辨距离）= ———— n sin q N：玻片与物镜间介质的折射率 显微观察时可根据物镜的特性而选用不同的介质 空气 (n=1.0)、水 (n=1.33)、香柏油 (n=1.52)、玻璃 ( n=1.54)

用浸没油取代空气的作 Microscope objective lens 介质折射率提高 fracted and Air reflected Unrefracted light rays Cover light rays ost to lens glass enter lens Slide Object 浸没油与玻璃的折射率相近 很多原来由于在透镜及载片表面的反射和折射而损失的 光线可以进入物镜，使照明亮度提高，改善观察效果

很多原来由于在透镜及载片表面的反射和折射而损失的 光线可以进入物镜，使照明亮度提高，改善观察效果。 用浸没油取代空气的作用： 介质折射率提高 数值孔径值和分辨率均得到提高 浸没油与玻璃的折射率相近

光学显微镜物镜的特性 物镜 特性 搜索物镜 低倍镜 高倍镜 油镜 放大倍数 4× 10× 40-45× 90-100× 数值孔径值 0.10 0.25 055-0.65 125-1.4 焦距(f) 40 mm 16 mm 4 mm 1.8-2.0mm 工作距离 17-20mm 4-8mm 0.5-0.7mm 0.1mm 450nm光源（蓝 2.3um 0.9μm 0.35um 0.18m 光)时的分辨率 Objective 人眼的分 发大 有效放大 Working distance Slide with specimen

物镜 特性 搜索物镜 低倍镜 高倍镜 油镜 放大倍数 4× 10× 40-45× 90-100× 数值孔径值 0.10 0.25 0.55-0.65 1.25-1.4 焦距（f） 40 mm 16 mm 4 mm 1.8-2.0 mm 工作距离 17-20 mm 4-8 mm 0.5-0.7 mm 0.1 mm 450nm 光源（蓝 光）时的分辨率 2.3 m 0.9 m 0.35 m 0.18 m 光学显微镜物镜的特性 人眼的分辨能力在0.2 mm左右，因此光学显微镜的最大 有效放大倍数（使用油镜）是1,000×到1,500×

显微镜的种类及原理 2.暗视野显微镜 Objective 普通光学显 透射照明。 Specimen

普通光学显微镜又称明视野显微镜 其照明光线直接进入视野，属透射照明。 一、显微镜的种类及原理 2. 暗视野显微镜

显微镜的 tmage piane 3.相差显微镜 Amplitude contrast is produced by light rays that are in reverse phase 形成亮背景 Phase ring 暗物象的结果 Phase plate Direct light rays are Most diffracted rays of light pass through phase plate unchanged because they 1/4 wave ngu as t miss the phase ring. pass throug的the phas0nng Diffracted rays are retarded 1/4 wavelenath after passing through objects Condense Annutar stoo

一、显微镜的种类及原理 3. 相差显微镜 形成亮背景 暗物象的结果

、 显微镜的种类及原理 Eye Eye Eye Ocular lens Ocular lens Diffraction(phase)plate Objectivelens Objective lens. Undiffracted light(phase Only light diffracted unaltered by specimen) Undiffracted light by the specimen Diffracted light Specimen is captured by (phase altered by specimen) the objective lens Specimen Condenser lens Condenser lens Opaque disc Annular diaphragm Light Light Light (a)Brightfield (b)Darkfield (c)Phase-contrast

一、显微镜的种类及原理

原理 4. combined with antibody Unknown 6.Bamiee flter lens 5.Specimen stained with fuorochrome 4.Dark-fleld conde se 1.Mercury vapor arc lamp

4. 荧光显微镜 一、显微镜的种类及原理