上海交通大学：《实验诊断学》课程教学课件（PPT讲稿）八年制综合实验

DNA定量检测HBV

HBV DNA定量检测

PCR基因的原理一、PCR技术的发展及原理1971年，Kleppe等人首次在文章中准确、客观地阐述了PCR方法。1985年，美国PE-Cetus公司的KaryMullis等人发明PCR技术

PCR基因的原理 一、PCR技术的发展及原理  1971年，Kleppe等人首次在文章中准确、客 观地阐述了PCR方法。  1985年，美国PE-Cetus公司的Kary Mullis等 人发明PCR技术

PCR原理PCR技术的本质是体外核酸扩增，加热使双链DNA解开螺旋，在退火温度条件下引物同模板DNA杂交，在TaqDNA聚合酶dNTPs，Mg2+和合适pH缓冲液存在条件下延伸引物，重复“变性一退火一引物延伸”过程至25-40个循环，呈指数级扩大待测样本中的核酸拷贝数

PCR原理  PCR技术的本质是体外核酸扩增，加热使 双链DNA解开螺旋，在退火温度条件下引 物同模板DNA杂交，在Taq DNA聚合酶， dNTPs，Mg2+和合适pH缓冲液存在条件 下延伸引物，重复“变性→退火→引物延 伸”过程至25-40个循环，呈指数级扩大待 测样本中的核酸拷贝数

待扩增DNA区域5'5'变性94℃ 5min5'5'55℃退火=5'5'5'570℃聚合5'5'5'5循环25-30次目标DNA片段达106-107PCR的基本原理

PCR的基本原理

PCR基因扩增仪的工作原理PCR基因扩增仪的工作原理PCR基因扩增仪工作关键是温度控制

PCR基因扩增仪的工作原理 PCR基因扩增仪的工作原理 PCR基因扩增仪工作关键是温度控制

荧光实时定量PCR(real-time quantitativePCR,RQ-PCR技术在PCR反应体系中加入特异性的荧光染料或探针，荧光信号的变化真实地反映了体系中模板的增加，通过检测荧光信号从而实时监测整个PCR反应过程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析

 技术在PCR反应体系中加入特异性的荧光 染料或探针，荧光信号的变化真实地反映 了体系中模板的增加，通过检测荧光信号， 从而实时监测整个PCR反应过程，最后通 过标准曲线对未知模板进行定量分析。 荧光实时定量PCR（real-time quantitative PCR,RQ-PCR）

荧光定量PCR（fluorescencequantitativePCR,FQ-PCR），又称实时PCR，是目前较精确的进行定量检测PCR的方法FQ-PCR通过荧光信号对PCR过程中产物量进行实时监测，精确计算出PCR的初始模板量

◼ 荧光定量PCR（fluorescence quantitative PCR,FQ￾PCR），又称实时PCR，是目前较精确的进行定量检测 PCR的方法 ◼ FQ-PCR通过荧光信号对PCR过程中产物量进行实时监 测，精确计算出PCR的初始模板量

荧光定量PCR是融合了PCR高灵敏性、DNA杂交高特异性和光谱分析的精确性，直接检测扩增过程中双链DNA荧光信号的变化以获得定量的结果系统内装置有半导体PCR、卤钨灯光源激发荧光信号(CCD）光栅分光、超低温光电耦合器摄象机收集荧First CycleSecond CycleThird Cycle光信号、计算机软件分析系统等。Met Arneal Replicate Melif Anneal RepicateMetAnneal ReplicateTemperatureTime

◼ 荧光定量PCR是融合了PCR高灵敏性、DNA杂交高特 异性和光谱分析的精确性，直接检测扩增过程中双链 DNA荧光信号的变化以获得定量的结果。 ◼ 系统内装置有半导体PCR、卤钨灯光源激发荧光信号、 光栅分光、超低温光电耦合器（CCD）摄象机收集荧 光信号、计算机软件分析系统等

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