上海交通大学：《医学实验技术》课程教学课件（PPT讲稿）蛋白质分离技术——层析

蛋白质分离技术-层析

蛋白质分离技术-层析

一、概述1、定义层析（又名色谱）一种利用混合物中各组分的物理化学性质间的差异，使各组分在层析两相中以不同程度分配，借此将各组分分离

一、概述 1、定义 层析(又名色谱) 一种利用混合物 中各组分的物理化学 性质间的差异，使各 组分在层析两相中以 不同程度分配，借此 将各组分分离

2、物理化学性质问的差异分子极性分子大小凝胶层析分子形状离子亲和力一离子交换层析亲和层析分子亲和力吸附能力吸附层析

分子极性 分子大小 分子形状 离子亲和力 分子亲和力 吸附能力 凝胶层析 离子交换层析 亲和层析 2、物理化学性质间的差异 吸附层析

3、层析的发展>1903年茨维特俄国植物学家发表了有关填充以菊根粉的玻璃柱分离植物色素，以石油醚冲洗，得到黄色、绿色区带；>1970s早期高效液相色谱法（HPLC)>目前气相层析仪和HPLC与色谱、质谱以及计算机联用

➢ 1903年 俄国植物学家 茨维特 发表了有关填充以菊根粉的玻璃柱分离植物 色素，以石油醚冲洗，得到黄色、绿色区带; ➢ 1970s早期 高效液相色谱法（HPLC) ➢ 目前 气相层析仪和HPLC与色谱、质谱以及计算机 联用。 3、层析的发展

层析法进行时有两个相，一个相称为固定相，另一相称为流动相。支持物含待分离物质

层析法进行时有两个相，一个相 称为固定相，另一相称为流动相。 支持物 含待分离物质

二.层析技术的分类1.按两相所处的状态分类气气固相层析液相层析以气体作为流动相气液液固以液体作为流动相液-液

气 相 层 析 液 相 层 析 气-固 气-液 液-固 液-液 二.层析技术的分类 1. 按两相所处的状态分类 以气体作为流动相 以液体作为流动相

2.按层析的机制可分为吸附层析分配层析凝胶层析亲和层析离子交换层析

2.按层析的机制可分为 ◼ 吸附层析 ◼ 分配层析 ◼ 凝胶层析 ◼ 亲和层析 ◼ 离子交换层析

（1）吸附层析原理定义在不同条件下，吸附剂指混合物随流动相通过与被吸附物之间的作用吸附剂时，由于吸附剂物理作用的范德华吸附：无对不同物质的吸附力而选择性，吸附速度快，吸使混合物分离的方法。附的过程是可逆的化学吸附由原子价力的作用引起。有选择性，吸附速度较慢，不易解吸在单位时问内被吸附于吸附剂的某一表面积上的分子和同一单佳时间内离开此表面的分子之问可以建立动态草衡吸附层析就是不断地产生单衡与不单衡，吸附与解吸

◼ 定义 指混合物随流动相通过 吸附剂时，由于吸附剂 对不同物质的吸附力而 使混合物分离的方法。 ◼ 原理 在不同条件下，吸附剂 与被吸附物之间的作用 物理作用的范德华吸附：无 选择性，吸附速度快，吸 附的过程是可逆的 化学吸附：由原子价力的作 用引起。有选择性，吸附 速度较慢，不易解吸 （1）吸附层析 在单位时间内被吸附于吸附剂的某一表面积上的分子和 同一单位时间内离开此表面的分子之间可以建立动态平衡， 吸附层析就是不断地产生平衡与不平衡，吸附与解吸

吸附层析常用的吸附剂氧化铝活性炭硅胶碱性：碳氢化合物粉末吸附力大流速慢颗粒吸附力中，流速易控中性醛酮酿酯内酯酸性：酸性色素醛，酸锦纶一活性炭吸附力猫聚酰胺锦纶66或锦纶6唯一用于生物活性物质酰胺基团羟基磷灰对酚DNP-氨基酸醒羧酸氢键：轻基与炭基

吸附层析 ◼ 常用的吸附剂 硅胶 碱性:碳氢化合物 中性:醛,酮,醌,酯,内酯 酸性:酸性色素,醛,酸 聚酰胺 氧化铝 活性炭 磷酸钙 粉末:吸附力大,流速慢 颗粒:吸附力中,流速易控 锦纶-活性炭:吸附力弱 锦纶66或锦纶6 酰胺基团 对酚,DNP-氨基酸, 醌,羧酸 氢键：羟基与羰基 唯一用于生物活性物质 羟基磷灰石

（2）分配层析利用不同组分在流动相和固定相中的分配系数不同而进行分离的方法

（2）分配层析 ——利用不同组分在流动相和固定相中的分配 系数不同而进行分离的方法