上海交通大学：《医学实验技术》课程教学课件（PPT讲稿）蛋白质分离技术——电泳

蛋白质分离技术-电泳

蛋白质分离技术-电泳

概述凝胶电泳：由原育、琼糖、淀粉胶及聚内烯酰按等物质作支持体的电泳特点：1.可以制成非常均匀的凝胶，带电质点在凝胶的孔中泳动。2.电泳操作方法简便，电泳速度快3.分辨率高，重复性好，电泳图谱清晰。4.适用于生化，免疫等定性定量测定

概 述 ◼ 凝胶电泳：由琼脂、琼脂糖、淀粉胶及聚丙烯酰 胺等物质作支持体的电泳。 ◼ 特点： 1.可以制成非常均匀的凝胶，带电质点在凝胶的孔 中泳动。 2. 电泳操作方法简便，电泳速度快 3. 分辨率高，重复性好，电泳图谱清晰。 4. 适用于生化，免疫等定性定量测定

琼脂糖凝胶从天然琼脂（agar）：又名琼胶、菜燕、冻粉石花菜及其它红藻类植物提取出来的一种线状高聚物。琼脂糖（agarose）琼脂胶（agaropectin）AcidsulfateCarboxylicacidgroups在电场作用下能产生较强的电渗现象

琼脂糖凝胶 天然琼脂（agar）:又名琼胶、菜燕、冻粉 从 石花菜及其它红藻类植物提取出来的一种线状高 聚物。 琼脂糖（agarose） 琼脂胶（agaropectin） Acid sulfate Carboxylic acid groups 在电场作用下能产生较强的电渗现象

■琼脂糖半乳糖及其衍生物构成的中性物质，不带电荷

◼ 琼脂糖 半乳糖及其衍生物构成的中性物质，不带 电荷

HOCH,OHOOHOCHOD-半乳糖3，6-脱水-L-半乳糖琼脂糖链依分子内和分子间氢键及其它力的作用使其互相盘绕形成绳状琼脂糖束，构成大网孔型凝胶

琼脂糖链依分子内和分子间氢键及其它力的作 用使其互相盘绕形成绳状琼脂糖束，构成大网孔型 凝胶。 D-半乳糖 3，6-脱水-L-半乳糖

CoofingLoosc,randomlyDoublehelixrcgionscoilcdagaroselinkcdby looso lincar strandschains

ageing45°100°℃~100°0finalgelstructureinitialgelsolstateFig.25.Gel structure of agarose.(Laas, T.Doctoral thesis.Acta Universitatis Upsaliensis1975.ReproducedbykindpermissionoftheAuthor.)

琼脂糖凝胶的特点（一）优点1.因不含硫酸根和羧基，几乎消除了琼脂的电渗2.对蛋白质吸附极微，故无拖尾现象3.凝胶结构均匀，孔径较大，可用来分离酶的复合物、核酸、病毒等大分子物质4.透明度较好，可直接或干燥成薄膜后进行染色5.不吸收紫外光，可直接利用紫外光吸收法作定量测定6.有热可逆性agaros8

琼脂糖凝胶的特点 （一）优点 1.因不含硫酸根和羧基，几乎消除了琼脂的电渗 2.对蛋白质吸附极微，故无拖尾现象。 3.凝胶结构均匀，孔径较大，可用来分离酶的复合 物、核酸、病毒 等大分子物质。 4.透明度较好，可直接或干燥成薄膜后进行染色。 5.不吸收紫外光，可直接利用紫外光吸收法作定量 测定 6.有热可逆性

（二）缺点1.机械强度差，易破碎，浓度不能太低2.易被细菌污染，不易保存，临用前配制3.琼脂糖支持层上的区带易于扩散，电泳后必须立即固定染色。4.与PAGE相比，分子筛作用小，区带少

（二）缺点 1.机械强度差，易破碎，浓度不能太低。 2.易被细菌污染，不易保存，临用前配制。 3.琼脂糖支持层上的区带易于扩散，电泳后 必须立即固定染色。 4.与PAGE相比，分子筛作用小，区带少

用应1.适用于大分子的核酸、核蛋白等的分离、鉴定及纯化2.临床生化检验中常用于LDH、CK等同工酶的分离与检测3.为不同类型的高脂蛋白血症、冠心病等提供生化指标

应 用 1. 适用于大分子的核酸、核蛋白等的分离、 鉴定及纯化 2. 临床生化检验中常用于LDH、CK等同工酶 的分离与检测 3. 为不同类型的高脂蛋白血症、冠心病等提 供生化指标