天津职业大学：《微生物与发酵工艺》课程教学课件（PPT讲稿）实训03 细菌的简单染色和革兰氏染色.ppt_大学文库

实训三细菌的简单染色和革兰氏染色微生物与发酵工艺

微生物中的细菌，其细胞小而透明，用压滴片或悬滴片在光学显微镜下观察时，菌体和背景没有明显的明暗差，不易看清其形态，更难以识别它们的结构。因此，需要对菌体进行染色，借助于染料使菌体着色后颜色的反衬作用，观察细菌的形状、基本结构(壁、膜、细胞质、核及内含物)及附属结构(荚膜、鞭毛、菌毛、芽孢等)

1.学习微生物的涂片染色的操作技术。 2.掌握微生物的简单染色、革兰氏染色的基本原理和方法。一、实验目的

微生物（尤其是细菌）的机体是无色透明的。在显微镜下，微生物体与其背景反差小，不易看清微生物的形态和结构。若增加反差。则微生物的形态皆可以看清楚。通常用染料将菌体染上颜色以增加反差，便于观察。二、实验原理

微生物细胞是由蛋白质、核酸等两性电解质及其他化合物组成，所以微生物细胞表现出两性电解质的性质。经测定，细菌的等电点在pH2—5之间，故细菌在中性、碱性或偏酸性的环境中，都体现酸性，带负电荷，容易与带负电荷的碱性染料结合，从而使菌体染色。菌体染色分为简单染色和复染. 二、实验原理

简单染色又称单染，只用一种染料使菌体着色。若仅为在显微镜下看清细菌形态，用单染即可。复染是指用两种或多种染料染细菌，目的是鉴别不同性质的细菌，主要方法有革兰氏染色法和抗酸性染色法。二、实验原理

革兰氏染色步骤是：先用草酸铵结晶紫染色，经媒染剂碘-碘化钾溶液处理后用乙醇脱色，最后用沙黄染液（也称蕃红染液）复染。如细菌能保持草酸铵结晶紫与碘的复合物而不被脱色，用蕃红液复染后仍呈紫色，则该细菌称为革兰氏阳性菌（G +）；被乙醇脱色用蕃红复染后呈现红色，则称为革兰氏阴性菌（G -）。现在已知，革兰氏染色结果与细菌细胞壁的结构组成有关。二、实验原理

1.菌种大肠杆菌(Escherichiacoli) 金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus) 枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis) 普通变形杆菌(Proteusvulgaris) 三、实验材料和用具

2.染液 ①简单染液：齐氏石炭酸复红染液 ②革兰氏染液草酸铵结晶紫染液(染液) 卢戈氏碘液(媒染剂) 95％乙醇或丙酮(脱色剂) 沙黄乙醇溶液(复染剂) 吕氏美蓝染液。三、实验材料和用具

3.用具显微镜、酒精灯、接种环、无菌水、香柏油、二甲苯、牙签、载玻片、纱布、滤纸、镜头纸、镊子、染色缸、火柴、玻片架、烧杯等。三、实验材料和用具