复旦大学：《微生物学实验》课程教学资源（实验讲稿）08 酸奶中乳酸菌的分离和菌种保藏

实验8酸奶中乳酸菌的分 寓和菌种保藏 主讲教师:王英明 复旦大学生物科学国家级实验教学示范中心

实验8 酸奶中乳酸菌的分 离和菌种保藏 复旦大学生物科学国家级实验教学示范中心 主讲教师：王英明

灭菌材料准备 每组MRS琼脂一瓶,150mL/瓶,倒十块平板 马铃薯葡萄糖半固体斜面4支

灭菌材料准备 每组MRS琼脂一瓶，150 mL／瓶，倒十块平板 马铃薯葡萄糖半固体斜面4支

原理 酸奶牛奶或羊奶的乳酸菌发酵产品。 乳酸菌能发酵糖类产生乳酸的细菌。革兰氏阳性,杆菌或球菌,无芽孢。 巴斯德1857年发现乳酸菌引起葡萄酒变酸,发明巴斯徳消毒法,拯救了法国的葡萄酒工业

酸奶 牛奶或羊奶的乳酸菌发酵产品。 乳酸菌 能发酵糖类产生乳酸的细菌。革兰氏阳性，杆菌或球菌，无芽孢。 巴斯德 1857年发现乳酸菌引起葡萄酒变酸，发明巴斯德消毒法，拯救了法国的葡萄酒工业。 原理

原理 梅契尼科夫1900年发现,保加利亚莫斯利安人长寿和常喝 酸奶有关,从酸奶中分离到保加利亚乳杄菌,创建酸奶工业。 乳酸菌的价值 营养价值:分解乳糖,产生乳酸。 2.保健活性:调理肠胃,促进消化 3.免疫调节活性。 益生菌(双歧杆菌等) 梅契尼科夫 合生元 益生元(寡聚果糖等)

梅契尼科夫1900年发现，保加利亚莫斯利安人长寿和常喝 酸奶有关，从酸奶中分离到保加利亚乳杆菌，创建酸奶工业。 乳酸菌的价值： 1. 营养价值：分解乳糖，产生乳酸。 2. 保健活性：调理肠胃，促进消化 3. 免疫调节活性。 益生菌（双歧杆菌等） 益生元（寡聚果糖等） 合生元 梅契尼科夫 原理

酸奶中常用的乳酸菌 乳杆菌属:德氏乳杄菌,嗜酸乳杄菌,植物乳杄菌,鼠李糖乳杄菌(LG) 干酪乳杆菌 双歧杆菌属:两歧双歧杆菌,长双歧杆菌,婴儿双歧杆菌 链球菌属:嗜热链球菌 乳球菌属:乳酸乳球菌

酸奶中常用的乳酸菌 • 乳杆菌属：德氏乳杆菌，嗜酸乳杆菌，植物乳杆菌，鼠李糖乳杆菌（LGG）， 干酪乳杆菌 • 双歧杆菌属：两歧双歧杆菌，长双歧杆菌，婴儿双歧杆菌 • 链球菌属：嗜热链球菌 • 乳球菌属：乳酸乳球菌

鼠李糖乳杆菌 长双歧杆菌

鼠李糖乳杆菌 长双歧杆菌

酸奶中乳酸菌分离(MRS) GB4789.35-2010食品微生物学检验乳酸菌检验乳酸菌计数用MRS

酸奶中乳酸菌分离（MRS） GB 4789.35-2010食品微生物学检验 乳酸菌检验乳酸菌计数用MRS

原理 菌种保藏采用干燥、低温、缺氧等条件抑制微生物的新陈代谢和生长繁殖,长期保 持微生物的不乱、不死、不变。一般保藏纯培养,优先选择休眠体(芽孢和孢子)。 常用方法 适用菌种 保藏原理 备注 斜面保藏法绝大多数 斜面培养物,4℃ 应换橡胶塞 半固体穿刺法 细菌和酵母菌半固体穿刺培养物,4℃C石蜡油/橡胶塞 甘油法(DMSO法)绝大多数菌悬液加甘油,-20/-80° *液氮法 绝大多数 加DMSO/液氮(-196℃) 最有效 砂土管法 休眠体 砂土管中加菌,干燥低温,熔封更佳 滤纸片法 细菌、放线菌和真菌滤纸片上加菌,干燥低温,熔封更佳 *冷冻真空干燥法 绝大多数 菌液加保护剂,低温抽真空4℃或室温保藏 冻干,熔封

原理 菌种保藏 采用干燥、低温、缺氧等条件抑制微生物的新陈代谢和生长繁殖，长期保 持微生物的不乱、不死、不变。一般保藏纯培养，优先选择休眠体（芽孢和孢子）。 常用方法 适用菌种 保藏原理 备注 斜面保藏法 绝大多数 斜面培养物，4 ℃ 应换橡胶塞 半固体穿刺法 细菌和酵母菌 半固体穿刺培养物，4 ℃ 石蜡油/橡胶塞 甘油法（DMSO法） 绝大多数 菌悬液加甘油，-20/-80 ℃ *液氮法 绝大多数 加DMSO/液氮（-196 ℃） 最有效 砂土管法 休眠体 砂土管中加菌，干燥 低温，熔封更佳 滤纸片法 细菌、放线菌和真菌 滤纸片上加菌，干燥 低温，熔封更佳 *冷冻真空干燥法 绝大多数 菌液加保护剂，低温抽真空 冻干，熔封 4 ℃或室温保藏

材料和仪器 1.菌种:市售酸奶。 2.培养基:MRS琼脂培养基。 3.试剂:厌氧指示条,变色硅胶,厌氧产气袋 Nero Pack- Anaero2.5L,草酸铵结晶紫染 色液 4.设备:恒温培养箱,方形培养盒(2.5L),显微镜。 5.器皿等:煤气灯,电子点火器,载玻片,接种环,试管和无菌培养皿等

1. 菌种：市售酸奶。 2. 培养基：MRS琼脂培养基。 3. 试剂：厌氧指示条，变色硅胶，厌氧产气袋AneroPack-Anaero 2.5 L，草酸铵结晶紫染 色液。 4. 设备：恒温培养箱，方形培养盒（2.5 L），显微镜。 5. 器皿等：煤气灯，电子点火器，载玻片，接种环，试管和无菌培养皿等。 材料和仪器

实验步骤 1.酵母菌的半固体穿刺接种酒酿实验分离的酵母菌斜面,接种针取菌,穿刺接种,28 ℃C培养3~4天,观察生长情况。 2.酸奶中乳酸菌的划线分离 (1)倒MRS平板; (2)取市售酸奶,划线分离,每一个同学划线4~5块平板; (3)取2块平板放在37℃,培养3~4天,观察生长情况和菌落特征。 (4)其余平板厌氧培养3~4天,观察生长情况和菌落特征 (5)简单染色,观察个体形态特征

1. 酵母菌的半固体穿刺接种 酒酿实验分离的酵母菌斜面，接种针取菌，穿刺接种，28 ℃培养3~4天，观察生长情况。 2. 酸奶中乳酸菌的划线分离 （1）倒MRS平板； （2）取市售酸奶，划线分离，每一个同学划线4~5块平板； （3）取2块平板放在37 ℃，培养3~4天，观察生长情况和菌落特征。 （4）其余平板厌氧培养3~4天，观察生长情况和菌落特征。 （5）简单染色，观察个体形态特征。 实验步骤