复旦大学：《微生物学实验》课程教学资源（实验讲稿）01 无菌材料准备和环境微生物的检测

实验1无菌材料准备和环境微生物的 检测 进入实验室,必须穿白大褂 两个同学一组,选择座位,收好第一个抽 屉钥匙和柜子钥匙 ·录像1消毒和灭菌 ·录像2无菌操作倒平板

实验1 无菌材料准备和环境微生物的 检测 • 进入实验室，必须穿白大褂 • 两个同学一组，选择座位，收好第一个抽 屉钥匙和柜子钥匙 • 录像1 消毒和灭菌 • 录像2 无菌操作倒平板

配制培养基 1、高氏1号培养基,液体培养基由教师配好,每组取一个250m 三角瓶中加入2.6克琼脂,再加160m液体培养基,包扎,做好标 记(XX组) 2、斜面培养基,教师准备高氏1号培养基,每组拿试管4支,每支 分装培养基4m,加帽。 121°C20分灭菌 斜面培养基待试管冷却至70℃后,垫适当厚度木板等来搁置 斜面,使斜面前沿在试管正中间,自然冷却过程中不得移动,待 彻底冷凝后收入柜子中。 高氏—号培养基取岀后趁热混匀沉底的琼脂,做好标记(X月 X日,高氏一号)后收入柜子中

配制培养基 1、高氏1号培养基，液体培养基由教师配好，每组取一个250 ml 三角瓶中加入2.6克琼脂，再加160 ml液体培养基，包扎，做好标 记（XX组）。 2、斜面培养基，教师准备高氏1号培养基，每组拿试管4支，每支 分装培养基4 ml，加帽。 121℃ 20分灭菌 斜面培养基待试管冷却至70℃后，垫适当厚度木板等来搁置 斜面，使斜面前沿在试管正中间，自然冷却过程中不得移动，待 彻底冷凝后收入柜子中。 高氏一号培养基取出后趁热混匀沉底的琼脂，做好标记（X月 X日，高氏一号）后收入柜子中

1、课程介绍 人员 教材 内容 评分 王英明 刘明秋

1、课程介绍  人员  教材  内容  评分 王英明 刘明秋

life. fudan. edu. cn/bioc 生物科学国家级实验教学示范中心(复旦大学) 中心介绍 实验教学 教学改革 学生科创 斑尾塍鹬 皇地△,上乐用 时间:3005年1月塞日 课程列表 4新闻公告 更多>> 2017年我院13级本科生在第二 修的 全2017-08-19

2、安全教育 煤气 着装 微生物安全 学习后签字

2、安全教育  煤气  着装  微生物安全  学习后签字

3、培养基 ·固体/液体/半固体培养基/(脱水培养基 天然/合成培养基 通用/选择/蓥别培养基 碳源/氮源/能源/水/无机盐/生长因子 肉汤培养基1L——天然培养基,成分不明确 牛肉膏粉3g,蛋白胨10g,NaC5g,pH74,琼脂16g

3、培养基 • 固体/液体/半固体培养基/（脱水培养基） • 天然/合成培养基 • 通用/选择/鉴别培养基 • 碳源/氮源/能源/水/无机盐/生长因子 肉汤培养基 1 L——天然培养基，成分不明确 牛肉膏粉3g，蛋白胨 10g，NaCl 5 g，pH7.4，琼脂 16g

高氏号固体培养基1L——合成培养基,成分明确 可溶性淀粉20g,KNO31g,K2HPO40.5g,MgSO47H20.5g, Na(05g,FeSO47H2O,0.01g,琼脂16g,pH=74; 氧化硫硫杄菌培养基1L NACI 0.52 g Nsource KH-PO4 28 MgSO4·7H2o0.25g CaCl2 2H20 0.07 g 硫粉 1.56 Energy source pH3.0

高氏一号固体培养基 1 L——合成培养基，成分明确 可溶性淀粉20g，KNO3 1g，K2HPO4 0.5g，MgSO4 · 7H2O 0.5g， NaCl 0.5g， FeSO4 ·7H2O，0.01g，琼脂 16g，pH=7.4； 氧化硫硫杆菌培养基 1 L NH4Cl 0.52 g N source KH2PO4 28 g MgSO4 · 7H2O 0.25 g CaCl2 2H2O 0.07 g 硫粉 1.56 g Energy source pH 3.0

高氏号固体培养基1L——合成培养基,成分明确 可溶性淀粉20g,KNO31g,K2HPO40.5g,MgSO47H2O0.5g, Na(0.5g,FeSO47H2○,0.01g,琼脂16g,pH=74 氧化硫硫杄菌培养基1L NH,CI 0.52 N source KH PO4 28 MgSO4·7H20.25g CaCl2 2H20 0.07 g 硫粉 1.56 Energy source H30 在5%CO2中培养基

高氏一号固体培养基 1 L——合成培养基，成分明确 可溶性淀粉20g，KNO3 1g，K2HPO4 0.5g，MgSO4 · 7H2O 0.5g， NaCl 0.5g， FeSO4 ·7H2O，0.01g，琼脂 16g，pH=7.4； 氧化硫硫杆菌培养基1 L NH4Cl 0.52g N source KH2PO4 28 g MgSO4 · 7H2O 0.25 g CaCl2 2H2O 0.07 g 硫粉 1.56 g Energy source pH 3.0 在5% CO2中培养基

灭菌相关概念 消毒:杀死有害微生物,酒精擦拭,食品消毒(牛奶的巴氏 消毒等)。 灭菌:杀死所有微生物就是常规方法检测不到样品中有活的 微生物。 抑菌:抑制微生物生长,比如低PH,低温,高渗透压(盐, 糖等),干燥等。 化疗:用药物选择性抑制寄主体內的病原微生物(包括肿 瘤),比如各种抗生素,磺胺等 防腐:抑制微生物的生长,进行食品保鲜

灭菌相关概念 • 消毒：杀死有害微生物，酒精擦拭，食品消毒（牛奶的巴氏 消毒等）。 • 灭菌：杀死所有微生物,就是常规方法检测不到样品中有活的 微生物。 • 抑菌：抑制微生物生长，比如低PH，低温，高渗透压（盐， 糖等），干燥等。 • 化疗：用药物选择性抑制寄主体内的病原微生物（包括肿 瘤），比如各种抗生素，磺胺等 • 防腐：抑制微生物的生长，进行食品保鲜

常用方法 干热灭菌:靠高温杀死微生物,160-180度,2小时。灼烧:火焰上烧 红 湿热灭菌:高温水蒸气杀灭微生物。如灭菌锅121度20分,根据样品特 调整温度和时间 化学药剂,消毒:新洁尔灭,0。2%,30min 辐照:紫外线消毒 过滤除菌:无菌滤器,孔径0.22微米,样品经过滤除去细菌等微生物 滤过性微生物不能除去

常用方法 • 干热灭菌：靠高温杀死微生物，160-180度，2小时。灼烧：火焰上烧 红。 • 湿热灭菌：高温水蒸气杀灭微生物。如灭菌锅121度20分，根据样品特 点，调整温度和时间。 • 化学药剂，消毒：新洁尔灭，0。2%，30min。 • 辐照：紫外线消毒 • 过滤除菌：无菌滤器，孔径0.22微米，样品经过滤除去细菌等微生物， 滤过性微生物不能除去