复旦大学：《微生物学实验》课程教学资源（实验讲稿）03 细菌和放线菌的个体形态观察

实验3细菌和放线菌的个体形态观察 牛肉膏蛋白胨琼脂培养基1瓶 液体培养基150mL+2.5g琼脂 5支试管,加帽,包扎 ·生理盐水1瓶 水150m加NaC|13g

• 牛肉膏蛋白胨琼脂培养基1瓶 液体培养基150 mL+2.5 g琼脂 • 5支试管，加帽，包扎 • 生理盐水1瓶 水150 mL加NaCl 1.3 g 实验3 细菌和放线菌的个体形态观察

线粒体 红细胞 A 叶绿体 典型细菌 蛋白质 鸡蛋 回做。0 原子 核糖体最小细菌 表皮绿胞 蛙卵 成年人 某些神 经细胞 0 t nm 1 nm 100 nm 1O um 100 um 1 mm 10 mm 100 mm 1 m 10 m 电子显微镜 光学显微镜 人眼 微生 物

微 生 物

形状 球菌 杆菌 螺旋菌

形状  球菌  杆菌  螺旋菌

球菌球形或椭圆形 排列方式:微球菌、双球菌、四联球菌、八叠球菌、链球菌和葡萄球菌 杆菌 螺旋菌 00 0000 8888 0000 双球菌 88 四联球菌 88 八叠球菌 链球菌 葡萄球菌

双球菌 四联球菌 八叠球菌 葡萄球菌 链球菌 • 球菌 球形或椭圆形 排列方式：微球菌、双球菌、四联球菌、八叠球菌、链球菌和葡萄球菌 • 杆菌 • 螺旋菌

球菌球形或椭圆形, 排列方式:微球菌、双球菌、四联球菌、八叠球菌、链球菌和葡萄球菌 杆菌短杄、棒杆、梭状、分枝杄菌,单个或链状 螺旋菌弧菌(不满一周)和螺旋菌 应 炭疽芽胞杆菌 大肠杆菌 双歧杆菌

炭疽芽胞杆菌 大肠杆菌 双歧杆菌 • 球菌 球形或椭圆形， 排列方式：微球菌、双球菌、四联球菌、八叠球菌、链球菌和葡萄球菌 • 杆菌 短杆、棒杆、梭状、分枝杆菌，单个或链状 • 螺旋菌 弧菌（不满一周）和螺旋菌

1、革兰氏染色 ◆涂片 挑一环水于洁净载玻片中央 无菌操作取金黄葡萄球菌,在水滴中涂布4~5周 灼烧环上残菌后,无菌操作取克雷伯氏菌,在水滴中反复涂布5圈 ×10,具体是从中央向外逐渐涂布5圈,然后再从中央向外涂布5圈。 将两种菌涂布均匀,成为直径约0.5cm的菌膜。 杀灭环上残菌。 ◆固定 载玻片在火焰上方来回过火数次,但要控制载玻片微热,不烫手,防 止过热,否则菌体聚集乃至变形严重。 固定不牢,染色过程中细菌会大量从载玻片上脱落,即载玻片上菌膜 必须干燥彻底

1、革兰氏染色  涂片 • 挑一环水于洁净载玻片中央； • 无菌操作取金黄葡萄球菌，在水滴中涂布4~5周； • 灼烧环上残菌后，无菌操作取克雷伯氏菌，在水滴中反复涂布5圈 ×10，具体是从中央向外逐渐涂布5圈，然后再从中央向外涂布5圈。 将两种菌涂布均匀，成为直径约0.5 cm的菌膜。 • 杀灭环上残菌。  固定 • 载玻片在火焰上方来回过火数次，但要控制载玻片微热，不烫手，防 止过热，否则菌体聚集乃至变形严重。 • 固定不牢，染色过程中细菌会大量从载玻片上脱落，即载玻片上菌膜 必须干燥彻底

◆染色 初染:加草酸铵结晶紫,染色1.5min,弃去染色液后水洗,稍干 媒染:加路德尔碘液,1.5min后弃去,水洗,稍干 脱色:滴加95%乙醇,稍摇动几下后马上弃去,重复1次,立即水洗; 复染:加沙黄染液,染色2min后弃去,水洗,用吸水纸轻轻吸干 ◆镜检观察,记录结果

 染色 • 初染：加草酸铵结晶紫，染色1.5 min，弃去染色液后水洗，稍干； • 媒染：加路德尔碘液，1.5 min后弃去，水洗，稍干； • 脱色：滴加95％乙醇，稍摇动几下后马上弃去，重复1次，立即水洗； • 复染：加沙黄染液，染色2 min后弃去，水洗，用吸水纸轻轻吸干。  镜检观察，记录结果

目镜 镜臂 转换器 物镜 标本夹 想电源 载物 光棚 亮度调节 聚光器 调节螺旋杆 粗调 光源 细调 镜座 正置光学显微镜结构

正置光学显微镜结构

染色的细菌装片置于载物台上 低倍镜下寻找合适的视野 转换油镜到工作位置 聚光器升至最高,可变光栅开至最大,亮度调至最亮 油镜头下的载玻片处滴加1~2滴香柏油 油镜头浸入香柏油中,转动粗校准螺旋,使镜头与玻片相切 目镜观察,缓慢粗调至岀现物像(降低载物台,禁止提升载物台) 细调至物像清晰,选取视野,记录结果

染色的细菌装片置于载物台上 低倍镜下寻找合适的视野 转换油镜到工作位置 聚光器升至最高，可变光栅开至最大，亮度调至最亮 油镜头下的载玻片处滴加1~2滴香柏油 油镜头浸入香柏油中，转动粗校准螺旋，使镜头与玻片相切 目镜观察，缓慢粗调至出现物像（降低载物台,禁止提升载物台） 细调至物像清晰，选取视野，记录结果

提升镜头或者降低载物台,聚光器降至最低位置 下降载物台,取下载玻片; 油镜保养 取擦镜纸,擦去镜头上香柏油;重复 至无油。 将4倍镜头转至工作位置 取擦镜纸,吸少量清洁剂,擦去残余 油迹,重复1次; 用擦镜纸检查,确认无油污。 关闭电源,将电源线绑好 放回显微镜,登记显微镜编 号、使用者和使用时间

油镜保养 提升镜头或者降低载物台，聚光器降至最低位置 将4倍镜头转至工作位置 关闭电源，将电源线绑好 放回显微镜，登记显微镜编 号、使用者和使用时间 下降载物台，取下载玻片； 取擦镜纸，擦去镜头上香柏油；重复 至无油。 取擦镜纸，吸少量清洁剂，擦去残余 油迹，重复1次； 用擦镜纸检查，确认无油污