复旦大学：《微生物学实验》课程教学资源（实验讲稿）05 AMES试验检验遗传毒性和霉菌的接种

实验5AMES试验检验传毒性和霉 菌的接种 (1)顶青霉和黑曲霉的三点接种; (2)蓝色犁头霉的八字接种; (3)AMES试验检测遗传毒性

实验5 AMES试验检验遗传毒性和霉 菌的接种 （1）顶青霉和黑曲霉的三点接种； （2）蓝色犁头霉的八字接种； （3）AMES试验检测遗传毒性

材料和仪器 (1)试管2支,5~10mL水试管。 (2)PDA,100m+1.6g琼脂/瓶。 (2)底层琼脂培养基,150mL+2.4ε琼脂/瓶,112℃C30min。 (3)上层半固体培养基,融化,3.5mL试管,7支,121℃20min

材料和仪器 （1）试管2支，5~10 mL水/试管。 （2）PDA，100 mL+1.6 g琼脂/瓶。 （2）底层琼脂培养基，150 mL+2.4 g琼脂/瓶，112 ℃ 30 min。 （3）上层半固体培养基，融化，3.5 mL/试管，7支，121 ℃ 20 min

1、青霉和曲霉的三点接种 倒PDA平板 ●菌种:顶青霉、黑曲霉各2块 ●皿底标记等距离的三点 三点接种要点 平板与火焰平行,相距<5cm ●接种针灭菌后沾无菌水后取菌(孢子) ●防止无意过火杀菌 菌种应该轻柔点接在平板表面。 ●是否接种成功? 28°℃倒置培养7天, ●是否污染? 不要移动 是否三点? ●菌落特征

菌种：顶青霉、黑曲霉各2块 皿底标记等距离的三点 平板与火焰平行，相距<5cm 接种针灭菌后沾无菌水后取菌（孢子） 防止无意过火杀菌 菌种应该轻柔点接在平板表面。 倒PDA平板 三点接种要点 28℃倒置培养7天， 不要移动 1、青霉和曲霉的三点接种 是否接种成功？ 是否污染？ 是否三点？ 菌落特征

2、蓝色犁头霉的八字接种 平板底部标记“八”字 蓝色犁头霉 菌株 八”字型接种 28℃倒置培养7天 观察个体形态

平板底部标记“八”字 蓝色犁头霉“＋”“－”菌株 “八” 字型接种 28℃倒置培养7天 观察个体形态 2、蓝色犁头霉的八字接种

3、Ames试验检测遗传毒性 Ames试验鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验。 用途:检测药物对细菌的致突变作用 ·检测原理:hi在含微量组氨酸的平板上发生有限次数分裂,形 成肉眼不可见的微小菌落。如果分裂时发生回复突变,his his,则继续分裂形成可见菌落。 无外界因素影响,his菌株自发突变仅形成少量可见菌落。加 入待测物,如果形成更多可见菌落,则说明待测物能够诱发回复突 变,即待测物对鼠伤寒沙门氏菌具有致突变作用,也可能对人有遗 传毒性

• Ames试验 鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验。 • 用途：检测药物对细菌的致突变作用。 • 检测原理：his-在含微量组氨酸的平板上发生有限次数分裂，形 成肉眼不可见的微小菌落。如果分裂时发生回复突变，his- →his+，则继续分裂形成可见菌落。 无外界因素影响， his-菌株自发突变仅形成少量可见菌落。加 入待测物，如果形成更多可见菌落，则说明待测物能够诱发回复突 变，即待测物对鼠伤寒沙门氏菌具有致突变作用，也可能对人有遗 传毒性。 3、Ames试验检测遗传毒性

材料和仪器 1.菌种:TA98。 2.仪器:恒温振荡培养箱,恒温培养箱,水浴锅等。 3.待测试剂:油性染发剂,水性染发剂,4-硝基O苯二胺(4- NOPD)。 4.培养基:(1)牛肉膏蛋白胨液体培养基。 (2)底层琼脂培养基,150mL+2.4g琼脂/瓶,112℃C30mins (3)上层半固体培养基,融化,3.5mL试管,121°C20min

材料和仪器 1. 菌种： TA98。 2. 仪器：恒温振荡培养箱，恒温培养箱，水浴锅等。 3. 待测试剂：油性染发剂，水性染发剂，4-硝基-O-苯二胺（4- NOPD）。 4. 培养基： （1）牛肉膏蛋白胨液体培养基。 （2）底层琼脂培养基，150 mL+2.4 g琼脂/瓶，112 ℃ 30 min。 （3）上层半固体培养基，融化，3.5 mL/试管，121 ℃ 20 min

步骤 TA9菌悬液 融化上层半固体培养基 融化底层琼脂培养基, (7支组),45℃保温150m瓶,冷却至0℃ 倒底层平板7块, 20mL/皿,冷凝 底层×7

TA98菌悬液 融化底层琼脂培养基， 150 mL/瓶，冷却至50 ℃ 融化上层半固体培养基 （7支/组），45 ℃保温 倒底层平板7块， 20 mL/皿，冷凝 底层×7 步骤

步骤 融化底层琼脂培养基, TA98菌悬液 融化上层半固体培养基 (7支组),45℃保温50mL瓶,冷却至0℃ 倒底层平板7块, 迅速将带菌上层倒入 20mL/皿,冷凝 底层平板上,铺匀 底层×7 冷凝 检测×7

TA98菌悬液 融化底层琼脂培养基， 150 mL/瓶，冷却至50 ℃ 融化上层半固体培养基 （7支/组），45 ℃保温 倒底层平板7块， 20 mL/皿，冷凝 底层×7 步骤 迅速将带菌上层倒入 底层平板上，铺匀 检测×7

步骤 TA9菌悬液 融化上层半固体培养基 融化底层琼脂培养基, (7支组),45℃保温50mL瓶,冷却至0℃ 倒底层平板7块, 迅速将带菌上层倒入 20mL/皿,冷凝 底层平板上,铺匀 底层×7 冷凝 检测×7 用镊子,无菌操作将沾有待测 物的纸片粘在检测平板中央 水样x1 油性染发剂×2 水性染发剂×2 4-NOPD×2

TA98菌悬液 融化底层琼脂培养基， 150 mL/瓶，冷却至50 ℃ 融化上层半固体培养基 （7支/组），45 ℃保温 倒底层平板7块， 20 mL/皿，冷凝 底层×7 步骤 迅速将带菌上层倒入 底层平板上，铺匀 检测×7 用镊子，无菌操作将沾有待测 物的纸片粘在检测平板中央 水样×1 油性染发剂×2 水性染发剂×2 4-NOPD×2

步骤 TA9菌悬液 融化上层半固体培养基 融化底层琼脂培养基, (7支组),45℃保温50mL瓶,冷却至0℃ 倒底层平板7块, 迅速将带菌上层倒入 20mL/皿,冷凝 底层平板上,铺匀 底层×7 冷凝 检测×7 用镊子,无菌操作将沾有待测 物的纸片粘在检测平板中央 水样x1 油性染发剂×2 水性染发剂×2 4-NOPD×2 37C培养48h 观察结果,计数和拍照

TA98菌悬液 融化底层琼脂培养基， 150 mL/瓶，冷却至50 ℃ 融化上层半固体培养基 （7支/组），45 ℃保温 倒底层平板7块， 20 mL/皿，冷凝 底层×7 步骤 迅速将带菌上层倒入 底层平板上，铺匀 检测×7 用镊子，无菌操作将沾有待测 物的纸片粘在检测平板中央 水样×1 油性染发剂×2 水性染发剂×2 4-NOPD×2 37 ℃培养48 h 观察结果，计数和拍照