复旦大学：《医学微生物学 Medical Microbiology》实验教学课件_实验5 细菌感染的的实验室诊断（粪便标本分离3）

实验五 实验内容 1录像:厌氧菌感染 2学生操作 (1)粪便标本分离(三):药敏实验及生化反应 (2)RPR试验 3示教:梅毒螺旋体、钩端螺旋体 4.讨论课:布鲁菌、炭疽芽胞杆菌、鼠疫耶尔森菌

实验五 实验内容 1.录像：厌氧菌感染 2.学生操作 （1）粪便标本分离（三）：药敏实验及生化反应 （2）RPR试验 3.示教：梅毒螺旋体、钩端螺旋体 4.讨论课：布鲁菌、炭疽芽胞杆菌、鼠疫耶尔森菌

粪便标本分离(三)药敏实验 材料:元菌棉。药敏纸片,平板。镊子 用无菌棉签取肉汤菌液密凃于普通平板上, 再用镊子将相应的药敏纸片贴在平椒上进 行培养。 注:四个药敏纸片不要贴的过于集中或分散,要距 髙适中,寸能得到比软理的试验结果

粪便标本分离（三）药敏实验 • 材料：无菌棉签，药敏纸片，平板，镊子 • 用无菌棉签取肉汤菌液密涂于普通平板上， 再用镊子将相应的药敏纸片贴在平板上进 行培养。 注：四个药敏纸片不要贴的过于集中或分散，要距 离适中，才能得到比较理想的试验结果

粪便标本分离(三)生化试验 材料:生理盐水、石蜡油、蒸馏水、吸头、移液器 AP10S生化反应条 能鉴定49种临床上常遇到的革兰阴性杆菌 ONPG GLU ARA LDC ODC CIT H2S URE TDA IND

粪便标本分离（三）生化试验 • 材料：生理盐水、石蜡油、蒸馏水、吸头、移液器 • API10S生化反应条 能鉴定49种临床上常遇到的革兰阴性杆菌

粪便标本分离(三)生化试验 细菌混是液制备 从培养好的肉汤中用接种环取两环菌至3m 无菌生理盐水中混勻,(550nn比色OD值为 0.125-0.25)之间,备用 ·试验条的准备: 试验条接种前需37℃孵育

粪便标本分离（三）生化试验 • 细菌混悬液制备： 从培养好的肉汤中用接种环取两环菌至3ml 无菌生理盐水中混匀，（550nm比色OD值为 0.125－0.25）之间，备用 • 试验条的准备： 试验条接种前需37℃孵育

粪便标本分离(三)生化试验 I.拿出生化反应条。在反应橧底部加入3m1蒸馏 水保证培养湿度; IⅠ.在反应条上根据标识进行加样: 用枪头在试验名称未作标识的在试验杯中加一半 菌液; 有下划线的加一半菌液后用石蜡液加满封闭 有方框的加满菌液 IⅠⅠ.加样后将生化反应槽盖上放入37℃温宝培养 16-18hr

粪便标本分离（三）生化试验 I. 拿出生化反应条，在反应槽底部加入3ml蒸馏 水保证培养湿度; II. 在反应条上根据标识进行加样： 用枪头在试验名称未作标识的在试验杯中加一半 菌液； 有下划线的加一半菌液后用石蜡液加满封闭； 有方框的加满菌液; III. 加样后将生化反应槽盖上放入37℃温室培养 16-18hr

加满菌液 12 412 4 1 =2222±22222 ONPG GLU ARA LDC ODCCITH2S URE TDA IND OX No2 加一半菌液后用石蜡液加满封闭 0NPG:2碑一硝基萃一B-D半爽 H2S:硫化氢 精苷 GLU:D葡寄糖 URE:脲素酶 ARA:L一阿拉伯糖 TDAL一色氛酸脱氨酶 LDC:L赖氨酸脱羧酶 IND:吲噪 0DC:L-鸟氨酸脱羧酶 0X:氧化酶 CIT:柠橄酸執 NO2:亚硝酸盐

ONPG:2磷－硝基苯－β－D-半乳 糖苷 H2S: 硫化氢 GLU: D-葡萄糖 URE：脲素酶 ARA：L-阿拉伯糖 TDA:L－色氨酸脱氨酶 LDC：L-赖氨酸脱羧酶 IND:吲哚 ODC: L-鸟氨酸脱羧酶 OX:氧化酶 CIT：柠檬酸钠 NO2:亚硝酸盐 1 2 4 1 2 4 1 2 4 1 2 4 ONPG GLU ARA LDC ODC CIT H2S URE TDA IND OX NO2 加一半菌液后用石蜡液加满封闭 加满菌液

梅毒抗体检测——非TP抗原试验 1.性病实验室玻片实验( venereal disease reference laboratory, VdRl) 牛心肌类脂与TP脂质成分或TP损伤宿主细胞释 放的抗原有交叉,可与反应素IM或IgG结合 牛心肌类脂 (抗原) 病人血清 (含反应素) 絮状沉淀(+)

梅毒抗体检测——非TP抗原试验 1.性病实验室玻片实验（venereal disease reference laboratory,VDRL) 牛心肌类脂与TP脂质成分或TP损伤宿主细胞释 放的抗原有交叉，可与反应素IgM或IgG结合: 牛心肌类脂 (抗原) ＋ 病人血清 (含反应素) 絮状沉淀（＋）

2快速血浆反应素环状卡片试验( rapid plasma reagin, RPR) VDRL的改良试验,适合大规模筛选,初筛 VDRL抗原+十 病人血清 活性炭颗粒 含反应素) 黑色凝集块

2.快速血浆反应素环状卡片试验（rapid plasma reagin,RPR） VDRL的改良试验， 适合大规模筛选，初筛 VDRL抗原+ 活性炭颗粒 ＋ 病人血清 （含反应素） 黑色凝集块

梅毒抗体检测(RPR) 每枭实验材料:(两人一组,每桌3组。每组做2份标本,靠走廊 的两人做阳性和阴性) l、 TRUST抗原悬液40u/×3支 2、标本1 40u/支×2支 3、标本2 40u/支×2支 4、阳性 40u/支×1支 5、阴性 40u/支×1支 6、试验专用卡片2孔/张×6张 7、50ul枪头5只/2人×3份(其中1只吸抗原,其余每人2只吸 标本) 8、50u枪 2把/桌

梅毒抗体检测（RPR） 每桌实验材料：（两人一组，每桌3组。每组做2份标本，靠走廊 的两人做阳性和阴性） 1、TRUST抗原悬液 40ul /支×3支 2、标本1 40ul /支×2支 3、标本2 40ul /支×2支 4、阳性 40ul /支×1支 5、阴性 40ul /支×1支 6、试验专用卡片 2孔 / 张×6张 7、50ul枪头 5只 / 2人×3份（其中1只吸抗原，其余每人2只吸 标本） 8、50ul枪 2把 / 桌

实验方法 1.将抗原用枪打匀,分别吸10ul于纸卡的 两个圆圈中。 2.将标本用枪打匀,各吸20ul于抗原中混 匀 3.按100转/分钟摇动8分钟,肉眼观察红色 凝聚物

实验方法 1. 将抗原用枪打匀，分别吸10ul于纸卡的 两个圆圈中。 2. 将标本用枪打匀，各吸20ul于抗原中混 匀。 3. 按100转/分钟摇动8分钟，肉眼观察红色 凝聚物