《医学基础化学》课程PPT教学课件（医用基础化学）第十三章 可见分光光度法和紫外分光光度法 Visible Spectrophotometry and Ultraviolet Spectrophotometry

第十三章可见分光光度法和紫外分光光度法Visible SpectrophotometryandUltravioletSpectrophotometry

第十三章 可见分光光度法和紫 外分光光度法 Visible Spectrophotometry and Ultraviolet Spectrophotometry

内容提要一、物质的吸收光谱二、分光光度法基本原理1.透光率和吸光度2.Lambert一Beer定律三、可见分光光度法1.分光光度计2.测定方法四、提高测量灵敏度和准确度的方法五、紫外分光光度法简介

内容提要 一、物质的吸收光谱 二、分光光度法基本原理 1.透光率和吸光度 2.Lambert—Beer定律 三、可见分光光度法 1.分光光度计 2.测定方法 四、提高测量灵敏度和准确度的方法 五、紫外分光光度法简介

教学基本要求掌握分光光度法的基本原理，Lambert一Beer定律以及透光率、吸光度、摩尔吸光系数等基本概念及相互关系。2.熟悉物质对光的选择性吸收，吸收光谱的意义可见分光光度法的测定方法一标准曲线法和标准对照法福3.了解光的基本性质，光的加和性：分光光度计的基本构造：比吸光系数比较法、差示分光光度法和双波长法的测定方法：提高测量灵敏度和准确度的方法；紫外分光光度法的一般概念

教学基本要求 1. 掌握分光光度法的基本原理，Lambert—Beer定 律以及透光率、吸光度、摩尔吸光系数等基本 概念及相互关系。 2. 熟悉物质对光的选择性吸收，吸收光谱的意义； 可见分光光度法的测定方法—标准曲线法和标 准对照法。 3. 了解光的基本性质，光的加和性；分光光度计 的基本构造；比吸光系数比较法、差示分光光 度法和双波长法的测定方法；提高测量灵敏度 和准确度的方法；紫外分光光度法的一般概念

第一节物质的吸收光谱一、物质对光的选择性吸收光照射某物质，物质能够吸收光，使原有的基态转为激发态，只有当分子的能量（hv）与被照射物质粒子的基态和激发态能量之差（日）相等时才能被吸收。M基态)+hvM*(激发态）物质对光的吸收具有选择性，若溶液选择性地吸收了某种颜色的光，则溶液呈吸收光的互补光

第一节 物质的吸收光谱 一、物质对光的选择性吸收 ◼ 光照射某物质，物质能够吸收光，使原有的 基态转为激发态，只有当分子的能量(h)与被 照射物质粒子的基态和激发态能量之差(E) 相等时才能被吸收。 M(基态)+ h ⎯→M*(激发态) ◼ 物质对光的吸收具有选择性，若溶液选择性 地吸收了某种颜色的光，则溶液呈吸收光的 互补光

第一节物质的吸收光谱红紫橙白光蓝黄蓝绿绿绿蓝互补色光示意图

第一节 物质的吸收光谱 互补色光示意图

第一节物质的吸收光谱二、物质的吸收光谱将不同波长的单色光依次通过有色溶液，测量溶液的吸光度A（absorbance）以波长为横坐标，吸光度A为纵坐标作图得吸收曲线，或称吸收光谱吸收光谱中，吸光度最大处的波长为最大吸收波长，用元max表示一般，入max是定性鉴别物质的基础。不同浓度的溶液，兄max不变，浓度与峰值成正比，这是进行定量分析的依据

第一节 物质的吸收光谱 二、物质的吸收光谱 ◼ 将不同波长的单色光依次通过有色溶液，测 量溶液的吸光度A(absorbance)。 ◼ 以波长为横坐标，吸光度A为纵坐标作图， 得吸收曲线，或称吸收光谱。 ◼ 吸收光谱中，吸光度最大处的波长为最大吸 收波长，用max表示。 ◼ 一般，max是定性鉴别物质的基础 。 ◼ 不同浓度的溶液，max不变，浓度与峰值成正 比，这是进行定量分析的依据

第一节物质的吸收光谱(4)1.0三（邻二氮菲）合铁（II)离子的吸收0.9光谱图（absorptionspectrum）0.80.7(3)Amax=510nm0.60.5不同浓度的溶液，Λmax不变0.4浓度与峰值成正比。(2)0.30.2(1)0.10400500600Λ/nm

第一节 物质的吸收光谱 三(邻二氮菲)合铁(II)离子的吸收 光谱图(absorptionspectrum) max=510nm 不同浓度的溶液，max不变， 浓度与峰值成正比

第二节分光光度法基本原理一、透光率（transmittance）和吸光度（absorbance）入射光强度l，吸收光强度la，透过光强度，反射光强度为lo=la+l+/被测溶液和参比溶液的吸收池同样材料和厚度反射光强度影响相互抵消，上式简化为lo= la + lt

第二节 分光光度法基本原理 一、透光率 (transmittance)和 吸光度(absorbance) ◼ 入射光强度I0，吸收光 强度Ia，透过光强度I t， 反射光强度为I r I0 ═ Ia + I t + I r ◼ 被测溶液和参比溶液的 吸收池同样材料和厚度， 反射光强度影响相互抵 消，上式简化为 I0 ═ Ia + I t

第二节分光光度法基本原理一、透光率和吸光度透射光的强度/与入射光强度1之比称为透光率（transmittance），用T表示T=lIo透光率的负对数称为吸光度，用符号A表示。A愈大，溶液对光的吸收愈多。-LA= -lgT = lg

第二节 分光光度法基本原理 一、透光率和吸光度 ◼ 透射光的强度I t与入射光强度I0之比称为透光 率(transmittance)，用T表示 ◼ 透光率的负对数称为吸光度，用符号A表示。 A愈大，溶液对光的吸收愈多。 0 t I I T = t 0 lg lg I I A= - T =

第二节分光光度法基本原理二、Lambert一Beer定律Lambert-Beer定律：A=cbc溶液厚度b，单位cm；浓度c，单位mol-L-1;摩尔吸光系数?（molarabsorptivity）单位：L·mol-1.cm-1若用质量浓度p代替cA=abp质量吸光系数（apercentangeabsorptivity）单位：L.g-1.cm-1a和河通过下式相互换算6=aM

第二节 分光光度法基本原理 二、Lambert—Beer定律 ◼ Lambert- Beer定律： A =bc 溶液厚度b，单位cm；浓度c，单位molL -1； 摩尔吸光系数(molar absorptivity ) 单位:Lmol -1 cm-1 ◼ 若用质量浓度代替c A ═ ab 质量吸光系数(apercentange absorptivity) 单位:Lg -1 cm-1 ◼ a和可通过下式相互换算  ═ aM