天津农学院：紫外可见分光光度计原理及操作（PPT讲稿，主讲：王海凤）

紫外-可见分光光度计 王海凤

紫外-可见分光光度计 王 海 凤

目录 紫外-可见分光光度计定义、仪器原理 1 及特点 紫外-可见分光光度计结构及类型 2 3 UV-Vis分光光度计测定 方法及分析条件的选择 UV-Vis分光光度计的 4 应用及保养

1 2 3 4 紫外-可见分光光度计定义、仪器原理 及特点 紫外-可见分光光度计结构及类型 UV-Vis分光光度计测定 方法及分析条件的选择 目录 UV-Vis分光光度计的 应用及保养

一、 紫外-可见分光光度计 定义、仪器原理及特点

一、紫外-可见分光光度计 定义、仪器原理及特点

定义 紫外-可见分光光度法，是根据物质的吸收光谱研究物 质的成分、结构和物质间相互作用的有效手段。 物质的吸收光谱就是物质中的分子和原子吸收了入射光 中的某些特定波长的光能量，相应地发生了分子振动能级跃 迁和电子能级跃迁的结果。由于各种物质具有各自不同的分 子、原子和不同的分子空间结构，其吸收光能量的情况也 就不相同，按所吸收光的波长区域不同，分为紫外分光光度 法和可见分光光度法，合称为紫外-可见分光光度法

紫外-可见分光光度法，是根据物质的吸收光谱研究物 质的成分、结构和物质间相互作用的有效手段。 物质的吸收光谱就是物质中的分子和原子吸收了入射光 中的某些特定波长的光能量，相应地发生了分子振动能级跃 迁和电子能级跃迁的结果。由于各种物质具有各自不同的分 子 、原子和不同的分子空间结构，其吸收光能量的情况也 就不相同，按所吸收光的波长区域不同，分为紫外分光光度 法和可见分光光度法，合称为紫外-可见分光光度法。 定义

米 原理 波长 200 400 8003200(nm) e YX-射线 紫外 可见 红外 微波 无线电 真空紫外 近红外 核磁共振 波长越短，能量越高

g -X-射线 紫外 可见 红外 微波 无线电 波长 200 400 800 3200(nm) 真空紫外 近红外 核磁共振 波长越短，能量越高 原理

原理 1)分子吸收光谱的形成过程： 运动的分子外层电子一一吸收外来辐射一一产生电子能级跃迁-一一分子吸收 谱。 2)由于各种物质具有各自不同的分子、原子和不同的分子空间结构，其吸 收光能量的情况也就不会相同。因此，每种物质就有其特有的、固定的吸收 光谱曲线，可根据吸收光谱上的某些特征波长处的吸光度的高低判别或测定 该物质的含量，这就是分光光度定性和定量分析的基础。 3)紫外分光光度法使用基于朗伯-比耳定律(Lambert-Beer)。 朗伯-比耳定律是光吸收的基本定律，俗称光吸收定律，是分光光度法 定量分析的依据和基础

1）分子吸收光谱的形成过程： 运动的分子外层电子-吸收外来辐射-产生电子能级跃迁-分子吸收 谱。 2）由于各种物质具有各自不同的分子、原子和不同的分子空间结构，其吸 收光能量的情况也就不会相同。因此，每种物质就有其特有的、固定的吸收 光谱曲线，可根据吸收光谱上的某些特征波长处的吸光度的高低判别或测定 该物质的含量，这就是分光光度定性和定量分析的基础。 3）紫外分光光度法使用基于朗伯-比耳定律(Lambert－Beer)。 朗伯-比耳定律是光吸收的基本定律，俗称光吸收定律，是分光光度法 定量分析的依据和基础。 原理

朗伯一比耳定律 一、 透射率T% 透射光1 入射光 光程长b 透射率T%=一×100%

入射光I 透射光 I 0 光程长b 一、透射率T% 透射率 T% = I I0 × 100% 朗伯-比耳定律

朗伯-比耳定律 当入射光波长一定时，待测溶液的吸光度4与其浓度和液层厚度 成正比，即 A=kbc k为比阿系数，与溶液性质、温度和入射波长有关。 y当浓度以gL表示时，称k为吸光系数，以a表示，即 A=abc y当浓度以molL表示时，称k为摩尔吸光系数，以ε表示，即 A=sbc ￡比a更常用。越大，表示方法的灵敏度越高。与波长有关，因 此，8常以8表示

当入射光波长一定时，待测溶液的吸光度A与其浓度和液层厚度 成正比，即 k 为比例系数，与溶液性质、温度和入射波长有关。  当浓度以 g/L 表示时，称 k 为吸光系数，以 a 表示，即  当浓度以mol/L表示时，称 k 为摩尔吸光系数，以 表示，即  比a更常用。越大，表示方法的灵敏度越高。与波长有关，因 此， 常以表示。 A = kbc A = abc A= bc 朗伯-比耳定律

紫外-可见分光光度计 特点 1.仪器设备和操作都比较简单， 费用少，分析速度快； 2.灵敏度高； 3.选择性好； 4.精密度和准确度较高； 5.用途广泛

紫外-可见分光光度计 特点 1. 仪器设备和操作都比较简单， 费用少，分析速度快; 2. 灵敏度高; 3. 选择性好; 4. 精密度和准确度较高; 5. 用途广泛

二、紫外-可见分光光度计 结构及类型

二、紫外-可见分光光度计 结构及类型