复旦大学：《分析化学》课程实验教学课件（仪器分析）荧光分光光度法测定面粉中核黄素

实验目的 荧光分光光度法测定 面粉中核黄素vB2) 实验原理 、FL-4500型气相色谱仪 复旦化学系 四、实验步骤 教学实验中心 五、数据处理 王丛笑 六、思考题 下一页 ① 15:41:01

15:41:01 荧光分光光度法测定 荧光分光光度法测定 荧光分光光度法测定 面粉中核黄素（（VBVB222）） 一、实验目的 二、实验原理 三、FL-4500型气相色谱仪 四、实验步骤 五、数据处理 六、思考题 复旦化学系 教学实验中心 王丛笑

实验目的 1、掌握面粉样品的消化方法,了解溶液的pH值等对核 黄素荧光强度的影响 2、了解荧光分光光度计的主要结构及工作原理,掌握 其正确使用方法。 荧光分析法基本原理和学习测绘核黄素的激发光谱 和荧光光谱,标准曲线法定量分析。 15:41:01

15:41:01 1、掌握面粉样品的消化方法，了解溶液的pH值等对核 黄素荧光强度的影响。 2、了解荧光分光光度计的主要结构及工作原理，掌握 其正确使用方法。 3、荧光分析法基本原理和学习测绘核黄素的激发光谱 和荧光光谱，标准曲线法定量分析。 一、实验目的

、实验原理 F1、荧光、荧光分子/荧光物质 2、荧光分析法:特点、定量方法 F|3、核黄素ⅤB2:结构、性质、面粉中提取方法 荧光分光光度计:结构、原理、操作 15:41:01

15:41:01 二、实验原理 1、荧光、荧光分子/荧光物质 2、荧光分析法：特点 、定量方法 3、核黄素VB2：结构、性质、 面粉中提取方法 4、荧光分光光度计：结构、原理、操作

问题1、荧光、荧光分子 荧光产生的机制—去活化过程 溶液中 1014-1012s1013-101l 102-10 振动弛豫内部转换 体系间的跨越 (发生在相同多重度间y(发生在不同多重度间) S iessr T2 10-15sA1 磷光发射 10-2-10s 基态S0 荧光发射外部转换 107-109s发生在不同电子能态间 熄灭) 15:41:01

15:41:01 荧光产生的机制——去活化过程 问题问题1. 1.荧光、荧光分子 荧光、荧光分子 荧光、荧光分子

强荧光物质 F结构特点:π→π*、共轭π体系、刚性平面结构、取代基 F°Qr” 如荧光素和酚酞结构十分相似 荧光素在溶液中有很强的荧光 COO 而酚酞没有 如芴和联苯在相同的条件下,荧 光量子产率约为1和0.18 15:41:01

15:41:01 强荧光物质 结构特点：π→π﹡ 、共轭 π 体系、 刚性平面结构、 取代基 如荧光素和酚酞结构十分相似， 荧光素在溶液中有很强的荧光， 而酚酞没有。 如芴和联苯在相同的条件下，荧 光量子产率约为1和0.18

F影响荧光发射溶液环境因素p362 a)溶剂效应:取决于荧光体和溶剂的化学结构、极 性、重原子效应(b)温度:T↑d↓(c)pH 平衡解离关系对1/m,均有影响 F溶液荧光的猝灭p364 广荧光物质分子与溶剂分子或溶质分子之间相互作用而导致荧光强度 下降的现象称为荧光的猝灭(或熄灭) 引起荧光猝灭的物质称为荧光猝灭剂 15:41:01

15:41:01 影响荧光发射溶液环境因素 p.362 ： （a）溶剂效应：取决于荧光体和溶剂的化学结构、极 性、重原子效应 （b）温度：T ↑ φf↓ （c）pH 平衡解离关系 对λf.max、φf 均有影响 溶液荧光的猝灭 p.364 荧光物质分子与溶剂分子或溶质分子之间相互作用而导致荧光强度 下降的现象称为荧光的猝灭（或熄灭） 引起荧光猝灭的物质称为荧光猝灭剂

问题2分子荧光分析法 方法的分类被测物理性质 相应的分析方法 辐射的发射发射光谱法(X射线、紫外、可见光等),火焰光度 法,荧光光溍法(X射线、紫外、可见光),磷光光 谱法,放射化学法 辐射的吸收分光光度法(X射线、紫外、可见光、红外),原子 光学分析法 吸收法,核磁共振波谱法,电子自旋共振波谱法 辐射的散射 浊度法,拉曼光谱法 辐射的折射 折射法,干涉法 辐射的衍射 Ⅹ射线衍射法,电子衍射法 辐射的旋转 偏振法,旋光色散法,圆二色性法 15:41:01

15:41:01 问题问题2. 2.分子荧光分析法 分子荧光分析法 分子荧光分析法

光谱名称的问题: 1.原子光谱与分子光谱 原子光谱:电子能级跃迁; 分子光谱:电子能级、振动能级、转动能级跃迁 2.吸收光谱与发射光谱 吸收光谱:从低能级向高能级跃迁,使光的强度减弱; 发射光谱:从高能级跃迁回低能级,相应的能量以光的形 口式辐射出来 广3.关系 原子光谱:原子吸收光谱、原子发射光谱; 分子光谱:分子吸收光谱(可见、紫外、红外吸收光谱) 15:41:01

15:41:01 1. 原子光谱与分子光谱 原子光谱：电子能级跃迁； 分子光谱：电子能级、振动能级、转动能级跃迁 2. 吸收光谱与发射光谱 吸收光谱：从低能级向高能级跃迁，使光的强度减弱； 发射光谱：从高能级跃迁回低能级，相应的能量以光的形 式辐射出来 3. 关系 原子光谱：原子吸收光谱、原子发射光谱； 分子光谱：分子吸收光谱（可见、紫外、红外吸收光谱） 光谱名称的问题：

原子光谱VS.分子光谱 E3 h v 原子光谱/线光 谱 Eo 电子跃迁能级 原子光谱 锐线光谱2 (单重态、三重态) h y 分子光谱/带光 谱: 电子跃迁能级 分子光谱 带状光谱 分子振动能级 动能级 15:41:01

15:41:01 原子光谱 V.S. 分子光谱 原子光谱/线光 谱： 电子跃迁能级 （单重态、三重态） 分子光谱/带光 谱： 电子跃迁能级 分子振动能级 分子转动能级

吸收光谱VS.发射光谱 激发光谱 荧光光谱 蒽的激发光谱(吸收光谱)和发射光谱(荧光光谱) 120 Reference material No. 1 Anthracene. Corrected Spectra 吸收光谱 发射光谱 激发光谱: xcitation Spectrun,激发波长1mm处 发射光谱 Emission Spectrum,发射波长:m IF 15:41:01

15:41:01 激发光谱 荧光光谱 λem.max处 IF～λex 吸收光谱 V.S. 发射光谱