河南农业职业学院：《果蔬贮藏运销学》课程教学资源（实验指导）实验二 不良环境对植物细胞膜的伤害

实验二 不良环境对植物细胞膜的伤害 一、原理 植物组织在受到各种不利的环境条件（如干旱、低温、高温、盐渍和大气污染）危害时，细胞膜的结构和 功能首先受到伤害，细胞膜透性增大。若将受伤害的组织浸入无离子水中，其外渗液中电解质的含量比正 常组织外渗液中含量增加，组织受伤害越严重，电解质含量增加越多。用电导仪测定外渗液电导率的变化， 可反映出质膜受伤害的程度。在电解质外渗透的同时，细胞内可溶性有机物也随之渗出，引起外渗液可溶 性糖、氨基酸、核苷酸等含量增加，氨基酸和核苷酸对紫外光有吸收，对紫外分光光度计测定受伤害组织 外渗液消光值，同样可反映出质膜受伤害的程度。用电导仪法和紫外法测定结果有很好的一致性。 二、材料与仪器设备 1、仪器设备 ⑴DDS—11A 型电导仪法； ⑵751—型紫外分光光度计； ⑶真空泵； ⑷真空干燥器； ⑸三用水浴； ⑹打孔器 ⑺剪刀； ⑻洗瓶； ⑼试管； ⑽移液管； ⑾玻棒； ⑿滤纸 2、试剂 去离子水 3、材料 低温处理过的黄瓜、番茄 三、方法步骤 1、清洗器具：由于电导仪变化非常灵敏，稍有杂质即产生很大误差。因此所用玻璃器具均需先用热肥皂水 洗，再用洗液洗涤，然后用自来水、无离子水各冲四到五遍（最好是容器口朝下用水冲）。向洗净的试管中 加入去离子水，用电导仪测定电导值，检查试管是否确实冼净。 2、取样及处理 选取果品，一份放入适温下贮藏，另一份放入过低温度下使其受冷害，作为处理。用打孔器及切片器将样 品制成厚薄均匀，大小一致的组织圆片，精确称取 2 克（或 10 个圆片），放入试管内，用去离子水冲洗三 次，然后加入 30ml 去离子水。对照和处理均设 3~4 个重复。 将试管放入真空干燥器内，开动真空泵抽气 10min，以抽出细胞间隙空气。缓慢放入空气，水即渗入细胞 间隙，组织圆片变成透明状，细胞内溶质易于渗出，取出试管，间隔几分钟振荡一次，在室温下保持 30min。 3、测定：将 DDS—11A 型电导仪电极插入试管，测定外渗液的电导值。测定之后，将试管放入水浴锅沸 水中 5min 以杀死组织。待冷至室温后，再次测定外渗液的电导值。 4、计算： （1）以细胞膜相对透性大小表示细胞受害的程度。通常按下式计算： 细胞膜相对透性（%）= L1/L2×100 式中：L1：组织杀死前外渗液的电导值；L2 组织杀死后外渗液的电导值。 （2）直接计算细胞膜伤害率，通常采用下式计算： 式中：C1：对照组织杀死前外渗液的电导值；C2：对照组织杀死后外渗液的电导值；T1：处理组织杀死前 外渗液的电导值；T2 处理组织杀死后外渗液的电导值

实验二 不良环境对植物细胞膜的伤害 一、原理 植物组织在受到各种不利的环境条件（如干旱、低温、高温、盐渍和大气污染）危害时，细胞膜的结构和 功能首先受到伤害，细胞膜透性增大。若将受伤害的组织浸入无离子水中，其外渗液中电解质的含量比正 常组织外渗液中含量增加，组织受伤害越严重，电解质含量增加越多。用电导仪测定外渗液电导率的变化， 可反映出质膜受伤害的程度。在电解质外渗透的同时，细胞内可溶性有机物也随之渗出，引起外渗液可溶 性糖、氨基酸、核苷酸等含量增加，氨基酸和核苷酸对紫外光有吸收，对紫外分光光度计测定受伤害组织 外渗液消光值，同样可反映出质膜受伤害的程度。用电导仪法和紫外法测定结果有很好的一致性。 二、材料与仪器设备 1、仪器设备 ⑴DDS—11A 型电导仪法； ⑵751—型紫外分光光度计； ⑶真空泵； ⑷真空干燥器； ⑸三用水浴； ⑹打孔器 ⑺剪刀； ⑻洗瓶； ⑼试管； ⑽移液管； ⑾玻棒； ⑿滤纸 2、试剂 去离子水 3、材料 低温处理过的黄瓜、番茄 三、方法步骤 1、清洗器具：由于电导仪变化非常灵敏，稍有杂质即产生很大误差。因此所用玻璃器具均需先用热肥皂水 洗，再用洗液洗涤，然后用自来水、无离子水各冲四到五遍（最好是容器口朝下用水冲）。向洗净的试管中 加入去离子水，用电导仪测定电导值，检查试管是否确实冼净。 2、取样及处理 选取果品，一份放入适温下贮藏，另一份放入过低温度下使其受冷害，作为处理。用打孔器及切片器将样 品制成厚薄均匀，大小一致的组织圆片，精确称取 2 克（或 10 个圆片），放入试管内，用去离子水冲洗三 次，然后加入 30ml 去离子水。对照和处理均设 3~4 个重复。 将试管放入真空干燥器内，开动真空泵抽气 10min，以抽出细胞间隙空气。缓慢放入空气，水即渗入细胞 间隙，组织圆片变成透明状，细胞内溶质易于渗出，取出试管，间隔几分钟振荡一次，在室温下保持 30min。 3、测定：将 DDS—11A 型电导仪电极插入试管，测定外渗液的电导值。测定之后，将试管放入水浴锅沸 水中 5min 以杀死组织。待冷至室温后，再次测定外渗液的电导值。 4、计算： （1）以细胞膜相对透性大小表示细胞受害的程度。通常按下式计算： 细胞膜相对透性（%）= L1/L2×100 式中：L1：组织杀死前外渗液的电导值；L2 组织杀死后外渗液的电导值。 （2）直接计算细胞膜伤害率，通常采用下式计算： 式中：C1：对照组织杀死前外渗液的电导值；C2：对照组织杀死后外渗液的电导值；T1：处理组织杀死前 外渗液的电导值；T2 处理组织杀死后外渗液的电导值

附电导仪使用方法： （1）将电极引线接到仪器相应接线柱上。 （2）接上稳压器，接通电源，打开电源开关。 （3）将开关拨向“校正”位置，调整调节器，使指针达到满偏。 （4）将开关拨向“测定”位置。指针应回到 0 点。 （5）拨动选择测定范围旋钮，使其处于测定范围之内，如不知测量范围，应先放在最大量程位置上，由大 到小逐级调整。 （6）将电极用量蒸馏水冲洗干净，并用滤纸吸去附着的水分。放在需测组织提取液中，待指针稳定后，读 出指针所指数值，此数值即该提取液的电导度。 （7）按上述方法测定组织圆片杀死后提取液电导度。 （8）将电极用蒸馏水冲洗干净，放在水中，如长期不用，则应将电极洗净晾干包装收藏。 注意事项：电导率测定的整个过程均需在恒温下进行，因为温度不仅影响细胞内离子内外渗透速度，而且 影响提取的电导率，一般每升高 1℃，电导率约增加 2%，通常以 25℃为标准温度，如不在 25℃下测定， 则要求把电导率换算为标准温度 25℃的电导率

附电导仪使用方法： （1）将电极引线接到仪器相应接线柱上。 （2）接上稳压器，接通电源，打开电源开关。 （3）将开关拨向“校正”位置，调整调节器，使指针达到满偏。 （4）将开关拨向“测定”位置。指针应回到 0 点。 （5）拨动选择测定范围旋钮，使其处于测定范围之内，如不知测量范围，应先放在最大量程位置上，由大 到小逐级调整。 （6）将电极用量蒸馏水冲洗干净，并用滤纸吸去附着的水分。放在需测组织提取液中，待指针稳定后，读 出指针所指数值，此数值即该提取液的电导度。 （7）按上述方法测定组织圆片杀死后提取液电导度。 （8）将电极用蒸馏水冲洗干净，放在水中，如长期不用，则应将电极洗净晾干包装收藏。 注意事项：电导率测定的整个过程均需在恒温下进行，因为温度不仅影响细胞内离子内外渗透速度，而且 影响提取的电导率，一般每升高 1℃，电导率约增加 2%，通常以 25℃为标准温度，如不在 25℃下测定， 则要求把电导率换算为标准温度 25℃的电导率