新疆大学：《细胞生物学》课程教学课件（PPT讲稿）实验九 液泡系和线粒体的活体染色及观察

AINJIANG UNIVERSIT 实验九 液泡系和线粒体的活体染色及观察 College of Life Science and Technology,XINJIANG Univercity

实验九 液泡系和线粒体的活体染色及观察 College of Life Science and Technology, XINJIANG Univercity

实验目的 学习并了解线粒体和液泡系超活染色的基本原 理、方法和注意事项； 学习如何观察动、植物活细胞内线粒体、液泡 系 了解动、植物活细胞内线粒体、液泡系的形态 数量与分布； 学习并掌握线粒体和液泡系的超活染色技术。 了解植物细胞液泡系的发育过程

一、实验目的 ◼ 学习并了解线粒体和液泡系超活染色的基本原 理、方法和注意事项； ◼ 学习如何观察动、植物活细胞内线粒体、液泡 系； ◼ 了解动、植物活细胞内线粒体、液泡系的形态、 数量与分布； ◼ 学习并掌握线粒体和液泡系的超活染色技术。 ◼ 了解植物细胞液泡系的发育过程

实验原理 活体染色是指对生活有机体的细胞或 组织能着色但又无毒害的一种染色方法。 它的目的是显示生活细胞内的某些结构， 而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、 化学变化以致引起细胞的死亡。活染技术 可用来研究生活状态下的细胞形态结构和 生理、病理状态

二、实验原理 活体染色是指对生活有机体的细胞或 组织能着色但又无毒害的一种染色方法。 它的目的是显示生活细胞内的某些结构， 而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、 化学变化以致引起细胞的死亡。活染技术 可用来研究生活状态下的细胞形态结构和 生理、病理状态

二、实验原理 根据所用染色剂的性质和染色方法的 不同，通常把活体染色分为体内活染与体 外活染两类。体内活染是以胶体状的染料 溶液注入动、植物体内，染料的胶粒固定、 堆积在细胞内某些特殊结构里，达到易于 识别的目的。体外活染又称超活染色，它 是由活的动、植物分离出部分细胞或组织 小块，以染料溶液浸染，染料被选择固定 在活细胞的某种结构上而显色

根据所用染色剂的性质和染色方法的 不同，通常把活体染色分为体内活染与体 外活染两类。体内活染是以胶体状的染料 溶液注入动、植物体内，染料的胶粒固定、 堆积在细胞内某些特殊结构里，达到易于 识别的目的。体外活染又称超活染色，它 是由活的动、植物分离出部分细胞或组织 小块，以染料溶液浸染，染料被选择固定 在活细胞的某种结构上而显色。 二、实验原理

实验原理 活体染料之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部 分，主要是染料的“电化学”特性起重要作用。碱性染料 的胶粒表面带阳离子，酸性染料的胶粒表面带阴离子，而 被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子，这样，它们彼 此之间就发生了吸引作用。但不是任何染料皆可以作为活 体染色剂之用，应选择那些对细胞无毒性或毒性较小的染 料，而且总是要配成稀淡的溶液来使用。一般是以碱性染 料最为适用，可能因为它具有溶解在类脂质（如卵磷脂、 胆固醇等)的特性，易于被细胞吸收。詹姆斯绿B(Janus green B)和中性红(neutral red)两种碱性染料是活体 染色剂中最重要的染料，对于线粒体和液泡系的染色各有 专一性

活体染料之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部 分，主要是染料的“电化学”特性起重要作用。碱性染料 的胶粒表面带阳离子，酸性染料的胶粒表面带阴离子，而 被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子，这样，它们彼 此之间就发生了吸引作用。但不是任何染料皆可以作为活 体染色剂之用，应选择那些对细胞无毒性或毒性较小的染 料，而且总是要配成稀淡的溶液来使用。一般是以碱性染 料最为适用，可能因为它具有溶解在类脂质（如卵磷脂、 胆固醇等）的特性，易于被细胞吸收。詹姆斯绿B（Janus green B）和中性红（neutral red）两种碱性染料是活体 染色剂中最重要的染料，对于线粒体和液泡系的染色各有 专一性。 二、实验原理

实验原理 线粒体是细胞内重要的细胞器，线粒体内膜上 分布有细胞色素氧化酶，该酶能使詹姆斯绿B 保持在氧化状态，呈现蓝绿色从而使线粒体显 色，而细胞质中的染料被还原成无色。 液泡是细胞内浓缩产物的主要场所，有十分重 要的功能。中性红是液泡的特殊染色剂，将液 泡染成红色。在活细胞中，细胞质和细胞核不 着色。如果细胞死亡，染料会弥散开来，使核 着色

◼ 线粒体是细胞内重要的细胞器，线粒体内膜上 分布有细胞色素氧化酶，该酶能使詹姆斯绿B 保持在氧化状态，呈现蓝绿色从而使线粒体显 色，而细胞质中的染料被还原成无色。 ◼ 液泡是细胞内浓缩产物的主要场所，有十分重 要的功能。中性红是液泡的特殊染色剂，将液 泡染成红色。在活细胞中，细胞质和细胞核不 着色。如果细胞死亡，染料会弥散开来，使核 着色。 二、实验原理

三、实验用品 (一)器材 显微镜、恒温水浴锅、解剖盘、剪刀、镊 子、双面刀片、载玻片、凹面载玻片、盖 玻片、表面皿、吸管、牙签、吸水纸等

三、实验用品 （一）器材 显微镜、恒温水浴锅、解剖盘、剪刀、镊 子、双面刀片、载玻片、凹面载玻片、盖 玻片、表面皿、吸管、牙签、吸水纸等

(主) 试剂 1、Ringer溶液（生理盐溶液 氯化钠0.85g（变温动物用0.65g);氯化钾0.25g; 氯化钙0.03g;蒸馏水100ml 2、10%、1/3000中性红溶液 称取0.5中性红溶于50 ml Ringeri溶液，稍加热(30~40 度)使之很快溶解，用滤纸过滤， 装入棕爸瓶宇暗处保 荐，否厕易氧化沉淀，失去染色能 临用前，取已配制的1%中性红溶液1ml,加入29ml Ringer溶液混匀，装入棕色瓶备用。 3.1%、1/5000詹姆斯绿B溶液 称取50mg詹姆斯绿B溶于5 ml Ringeri溶液中，稍加微热 (3040度)使之溶解，用滤纸过滤后，即为1%原液。取 1%原液1ml加入49m!Ringer溶液，即成1/5000工作液 装入瓶中备角。最好现甬现配，以保持它的充分氧化能

（二）试剂 1、Ringer 溶液（生理盐溶液） 氯化钠0.85g（变温动物用0.65g） ；氯化钾 0.25g ； 氯化钙 0.03g ；蒸馏水100ml 2、10%、1/3000中性红溶液 称取0.5中性红溶于50ml Ringer溶液，稍加热（30~40 度）使之很快溶解，用滤纸过滤，装入棕色瓶于暗处保 存，否则易氧化沉淀，失去染色能力。 临用前，取已配制的1%中性红溶液1ml，加入29ml Ringer溶液混匀，装入棕色瓶备用。 3．1%、1/5000詹姆斯绿B溶液 称取50mg詹姆斯绿B溶于5ml Ringer溶液中，稍加微热 （30~40度）使之溶解，用滤纸过滤后，即为1%原液。取 1%原液1ml加入49ml Ringer溶液，即成1/5000工作液， 装入瓶中备用。最好现用现配，以保持它的充分氧化能 力

（三)材料 人口腔上皮细胞 洋葱鳞茎内表皮细胞 绿豆幼根根尖或黄豆幼根根尖

（三）材料 ◼ 人口腔上皮细胞 ◼ 洋葱鳞茎内表皮细胞 ◼ 绿豆幼根根尖或黄豆幼根根尖

四、实验步骤 (一)线粒体的超活染色与观察 1、线粒体是细胞进行呼吸作用的场所，其形态和 数量虽不同物种、不同组织器官和不同的生理 状态而发生变化。 1)人口腔粘膜上皮细胞线粒体的超活染色与观察 (1)取清洁载玻片放在37℃恒温水浴锅的金属板 上，滴2滴1/5000詹纳斯绿B染液

四、实验步骤 （一）线粒体的超活染色与观察 1、线粒体是细胞进行呼吸作用的场所，其形态和 数量虽不同物种、不同组织器官和不同的生理 状态而发生变化。 1）人口腔粘膜上皮细胞线粒体的超活染色与观察 ⑴取清洁载玻片放在37℃恒温水浴锅的金属板 上，滴2滴1/5000詹纳斯绿B染液