呼和浩特职业学院：《生物分离与检测技术》课程教学课件（PPT讲稿）第七章 色谱分离技术

可蘭 发酵液 预处理 → 提取→ 精制 一产品 (细胞培养液) 加热 沉淀 重结晶 浓缩 调pH值 吸附 膜分离 干燥 絮凝 萃取 色谱分离 无菌过滤 凝聚 超滤 成型 膜分离

发酵液 (细胞培养液 ) 预处理 提取 精制 产品 加热 调pH值 絮凝 凝聚 沉淀 吸附 萃取 超滤 膜分离 重结晶 膜分离 色谱分离 浓缩 干燥 无菌过滤 成型

色谱分离技术 7

7 色谱分离技术

主要内容 07.1 概述 ●7.2 常见的色谱分离技术 ●7.3 高效液相色谱分离检测技术 ●7.4 工作任务解析 07.5 实训项目：薄层色谱法分离混合糖

主要内容 ⚫ 7.1 概述 ⚫ 7.2 常见的色谱分离技术 ⚫ 7.3 高效液相色谱分离检测技术 ⚫ 7.4 工作任务解析 ⚫ 7.5 实训项目：薄层色谱法分离混合糖

7.1概述 ●7.1.1 色谱概念 ●7.1.2 色谱发展简史 ●7.1.3色谱关键术语 ●7.1.4色谱法的分类 ●7.1.5 色谱法的特点及应用9 ●7.1.6色谱法的应用 604 薄层扫描仪

⚫7.1.1 色谱概念 ⚫7.1.2 色谱发展简史 ⚫7.1.3 色谱关键术语 ⚫7.1.4 色谱法的分类 ⚫7.1.5 色谱法的特点及应用 ⚫7.1.6 色谱法的应用 7.1 概述

7.1.1 】色谱概念(Chromatogr aphy). ●色谱分离技术又称色层法、层析法、层离法等，是 一种利用混合物中各组分的物理化学性质的差别使 各组分以不同程度分布在两个相中，从而达到分离 的技术。 分子的形状和大小 分子极性 吸附力 分子亲和力 分配系数等

7.1.1 色谱概念（Chromatography) ⚫ 色谱分离技术又称色层法、层析法、层离法等，是 一种利用混合物中各组分的物理化学性质的差别使 各组分以不同程度分布在两个相中，从而达到分离 的技术。 分子的形状和大小 分子极性 吸附力 分子亲和力 分配系数等

7.1.2 色谱发展简史 ●1903-1906年，俄国科学家Tswett首先提出来 流动的 (流动相) 叶绿素的石油醚溶液 溶剂 实 固定相 碳酸钙管柱 (固定的) 验 ↓ 碳酸步 过 石油醚淋洗 色谱带 一朝数下素 ↓ 计绿需。 程 碳酸钙对叶绿素中不同 色素的吸附力不同 色带

⚫ 1903-1906年，俄国科学家Tswett首先提出来 7.1.2 色谱发展简史 叶绿素的石油醚溶液 碳酸钙管柱 石油醚淋洗 碳酸钙对叶绿素中不同 色素的吸附力不同 色带 实 验 过 程 固定相 （固定的） 流动的 （流动相）

7.1.3 关键术语 ● 固定相：是色谱分离的一个基质。通常为表面积较大的固 体或附着在固体上且不发生移动的液体。 对色谱分离效果起着关键作用 ●流动相：在层析过程中，推动固定相上待分离的物质朝着 一个方向移动的液体、气体等，都称为流动相。 是色谱分离中的重要影响因素之一

⚫ 固定相：是色谱分离的一个基质。通常为表面积较大的固 体或附着在固体上且不发生移动的液体。 ⚫ 流动相：在层析过程中，推动固定相上待分离的物质朝着 一个方向移动的液体、气体等，都称为流动相。 7.1.3 关键术语

实例： ●GB:HPLC法测定食品中苏丹红染料 ● (1)色谱柱：Zorbax SB-C183.5μm 4.6mm150mm（或相当型号色谱柱) (2)流动相： 溶剂A0.1%甲酸的水溶液：乙腈=85：15 溶剂B0.1%甲酸的乙腈溶液：丙酮=80：20

实例： ⚫ GB:HPLC法测定食品中苏丹红染料 ⚫ （1）色谱柱：Zorbax SB-C18 3.5μm 4.6mm150mm（或相当型号色谱柱） ⚫ （2）流动相： ⚫ 溶剂A 0.1%甲酸的水溶液 ：乙腈 = 85 ：15 ⚫ 溶剂B 0.1%甲酸的乙腈溶液 ：丙酮 = 80 ：20

7.1.4 色谱法的分类 ●7.1.4.1按两相所处的状态分类： 气相色谱：用气体作流动相的称为气相色谱。 ●液相色谱：用液体作流动相的称为液相色谱。 ●超临界流体色谱法(SFC)：用超临界流体作为流动相。 液相色谱 气相色增

7.1.4 色谱法的分类 ⚫ 7.1.4.1 按两相所处的状态分类： ⚫ 气相色谱：用气体作流动相的称为气相色谱。 ⚫ 液相色谱：用液体作流动相的称为液相色谱。 ⚫ 超临界流体色谱法（SFC）：用超临界流体作为流动相。 气相色谱 液相色谱

7.1.4.2 按操作形式不同 柱层析：将固定相装于柱内。 洗脱剂 纸层析：用滤纸做液体的载体。 展开剂 薄层层析：将适当粒度的吸附剂铺成薄层，以 纸层析类似的方法进行物质的分离和鉴定。 柱层析 纸层析 薄层色谱

7.1.4.2 按操作形式不同 柱层析 纸层析 薄层色谱 柱层析：将固定相装于柱内。 纸层析：用滤纸做液体的载体。 薄层层析：将适当粒度的吸附剂铺成薄层，以 纸层析类似的方法进行物质的分离和鉴定。 洗脱剂 展开剂