新疆轻工职业技术学院：《食品检测技术》课程教学资源（PPT课件）模块七 食品微生物检测 7.3 实验二 酵母菌大小的测定

实验二 酵母菌大小的测定和细胞计数 一、实验目的 1、学会测微尺和血球计数板的使用方法。 2、建立对微生物大小的概念。 二、实验材料 1、显微镜、物镜测微尺、目镜测微尺、血球计数 板、载玻片等。 2、麦芽汁培养基、酵母菌。 3、吸管、吸水纸等

实验二 酵母菌大小的测定和细胞计数 一、实验目的 1、学会测微尺和血球计数板的使用方法。 2、建立对微生物大小的概念。 二、实验材料 1、显微镜、物镜测微尺、目镜测微尺、血球计数 板、载玻片等。 2、麦芽汁培养基、酵母菌。 3、吸管、吸水纸等

三、实验原理 (一)酵母菌大小的测定原理 所有微生物的大小需要用刻有一定刻度的测微 尺来测量，先用绝对长度的物镜测微尺来校正不表 示绝对长度的目镜测微尺，计算后者每格所代表的 实际长度，然后放上待测的标本，用目镜测微尺测 定标本上微生物细胞占目镜测微尺的格数，就可计 算该微生物的大小。酵母菌的直径约8-10μm

三、实验原理 (一)酵母菌大小的测定原理 所有微生物的大小需要用刻有一定刻度的测微 尺来测量，先用绝对长度的物镜测微尺来校正不表 示绝对长度的目镜测微尺，计算后者每格所代表的 实际长度，然后放上待测的标本，用目镜测微尺测 定标本上微生物细胞占目镜测微尺的格数，就可计 算该微生物的大小。酵母菌的直径约8-10μm

(二)酵母细胞计数原理 微生物常用的计数方法有两种，即直接计数法 和间接计数法。前者利用血球计数板在显微镜下直 接计数，能立即得到数值，但死活细胞都计数在内。 后者是在乎板上长成菌落后再计数，反应较真实， 但费时太长。本实验是利用血球计数板进行直接计 数。计数前需对样品做适当稀释，按照规定方法及 计算公式运算后，即可得出实际数值

(二)酵母细胞计数原理 微生物常用的计数方法有两种，即直接计数法 和间接计数法。前者利用血球计数板在显微镜下直 接计数，能立即得到数值，但死活细胞都计数在内。 后者是在乎板上长成菌落后再计数，反应较真实， 但费时太长。本实验是利用血球计数板进行直接计 数。计数前需对样品做适当稀释，按照规定方法及 计算公式运算后，即可得出实际数值

四、操作方法 (一)酵母菌大小测定的操作方法 1.测微尺的构造和使用方法 (1)目镜测微尺的构造 目镜测微尺是一块圆形玻片， 其中央刻有精确的刻度，通常是将5mm划分为50格， 实际每格等于100μm。刻度的大小是随使用的接目 镜和接物镜的放大倍数而改变，用前必须用物镜测微 尺来标定，如图。 (2)物镜测微尺的构造 物镜测微尺为一块特制的载 玻片，其中央有一小圆圈。圆圈内刻有分度，将长 1mm的直线等分为100小格，每小格等于10μm，如 图

四、操作方法 (一)酵母菌大小测定的操作方法 1.测微尺的构造和使用方法 (1)目镜测微尺的构造 目镜测微尺是一块圆形玻片， 其中央刻有精确的刻度，通常是将5mm划分为50格， 实际每格等于100μm。刻度的大小是随使用的接目 镜和接物镜的放大倍数而改变，用前必须用物镜测微 尺来标定，如图。 (2)物镜测微尺的构造 物镜测微尺为一块特制的载 玻片，其中央有一小圆圈。圆圈内刻有分度，将长 1mm的直线等分为100小格，每小格等于10μm，如 图

2.目镜测微尺的标定 (1)取下接目镜，旋下目镜上的目透镜，将目镜测微 尺放人接目镜的中隔板上，使有刻度的一面朝下， 再旋上目透镜，并装入镜筒内。 (2)将物镜测微尺置于显微镜的载物台上，使有刻度 的一面朝上，同观察标本一样，使具有刻度的小圆 圈位于视野中央。 (3)先用低倍镜观察，对准焦距，待看清物镜测微尺 的刻度后，转动目镜，使目镜测微尺的刻度与物镜 测微尺的刻度相平行，并使两尺的左边第一条线相 重合，再向右寻找两尺的另外一条重合线。如图 (4)记录二条重合线间的目镜测微尺的格数和物镜测 微尺的格数

2.目镜测微尺的标定 (1)取下接目镜，旋下目镜上的目透镜，将目镜测微 尺放人接目镜的中隔板上，使有刻度的一面朝下， 再旋上目透镜，并装入镜筒内。 (2)将物镜测微尺置于显微镜的载物台上，使有刻度 的一面朝上，同观察标本一样，使具有刻度的小圆 圈位于视野中央。 (3)先用低倍镜观察，对准焦距，待看清物镜测微尺 的刻度后，转动目镜，使目镜测微尺的刻度与物镜 测微尺的刻度相平行，并使两尺的左边第一条线相 重合，再向右寻找两尺的另外一条重合线。如图 (4)记录二条重合线间的目镜测微尺的格数和物镜测 微尺的格数

3.计算方式 (1)目镜测微尺每格长度=两个重叠刻度间物镜测微 尺格数×10／两个重叠刻度间目镜测微尺格数 (2)以同样方法，分别在不同倍率的物镜下测定测微 尺上每格的实际长度。 目镜测微尺( )格=物镜测微尺( )格 目镜测微尺每格=( ) (3)如此测定后的目镜测微尺的尺度，仅适用于测定 时所用的显微镜的目镜和物镜的放大倍数。若更换 物镜、目镜的放大倍数时，必须再进行校正标定

3.计算方式 (1)目镜测微尺每格长度=两个重叠刻度间物镜测微 尺格数×10／两个重叠刻度间目镜测微尺格数 (2)以同样方法，分别在不同倍率的物镜下测定测微 尺上每格的实际长度。 目镜测微尺( )格=物镜测微尺( )格 目镜测微尺每格=( ) (3)如此测定后的目镜测微尺的尺度，仅适用于测定 时所用的显微镜的目镜和物镜的放大倍数。若更换 物镜、目镜的放大倍数时，必须再进行校正标定

4.酵母菌大小的测定 (1)取下物镜测微尺，换上酵母菌水浸制片。 (2)测量菌体的长度和宽度各占目镜测微尺几格， 然后换算出菌体的实际长度。 (3)在同一标本上测定5-10个菌体，求其平均值

4.酵母菌大小的测定 (1)取下物镜测微尺，换上酵母菌水浸制片。 (2)测量菌体的长度和宽度各占目镜测微尺几格， 然后换算出菌体的实际长度。 (3)在同一标本上测定5-10个菌体，求其平均值

(二)酵母细胞数的测定操作方法 1.血球计数板的构造 血球计数板是由一块比普通载玻片厚的特制 玻片制成的。玻片中有四条下凹的槽，构成三个 平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽隔 为两半，每半边上面个刻有一个方格网。方格网 上刻有9个大方格，其中只有中间的一个大方格 为计数室，供微生物计数用。这一大方格的长和 宽各为1m，深度为，其体积为0.1mm3

(二)酵母细胞数的测定操作方法 1.血球计数板的构造 血球计数板是由一块比普通载玻片厚的特制 玻片制成的。玻片中有四条下凹的槽，构成三个 平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽隔 为两半，每半边上面个刻有一个方格网。方格网 上刻有9个大方格，其中只有中间的一个大方格 为计数室，供微生物计数用。这一大方格的长和 宽各为1m，深度为，其体积为0.1mm3

计数室通常有两种规格。一种是大方格内分为16中格， 每一中格又分为25小格；另一种是大方格内分为25中 格，每一中格又分为16小格。但是不管计数室是哪一 种构造；它们都有一个共同的特点，即每一大方格都 是由16×25=25×16=400个小方格组成，见图。 2.血球计数板的使用 (1)用血球计数板计数酵母菌悬液的酵母菌个数。 (2)样品稀释的目的是便于酵母菌悬液的计数，以每 小方格内含有4-5个酵母细胞为宜，一般稀释10倍即 可

计数室通常有两种规格。一种是大方格内分为16中格， 每一中格又分为25小格；另一种是大方格内分为25中 格，每一中格又分为16小格。但是不管计数室是哪一 种构造；它们都有一个共同的特点，即每一大方格都 是由16×25=25×16=400个小方格组成，见图。 2.血球计数板的使用 (1)用血球计数板计数酵母菌悬液的酵母菌个数。 (2)样品稀释的目的是便于酵母菌悬液的计数，以每 小方格内含有4-5个酵母细胞为宜，一般稀释10倍即 可

(3)将血球计数板用擦镜纸擦净，在中央的计数室上 加盖专用的厚玻片。 (4)将稀释后的酵母菌悬液，用吸管吸取一滴置于盖 玻片的边缘，使菌液缓缓渗入，多余的菌液用吸水 纸吸取，捎待片刻，使酵母菌全部沉降到血球计数 室内。 (5)计数时，如果使用16格×25格规格的计数室，要 按对角线位，取左上、右上、左下、右下4个中格 （即100个小格）的酵母菌数。如果规格为25格 ×16格的计数板，除了取其4个对角方位外，还需 再数中央的一个中格(即80个小方格)的酵母菌数

(3)将血球计数板用擦镜纸擦净，在中央的计数室上 加盖专用的厚玻片。 (4)将稀释后的酵母菌悬液，用吸管吸取一滴置于盖 玻片的边缘，使菌液缓缓渗入，多余的菌液用吸水 纸吸取，捎待片刻，使酵母菌全部沉降到血球计数 室内。 (5)计数时，如果使用16格×25格规格的计数室，要 按对角线位，取左上、右上、左下、右下4个中格 （即100个小格）的酵母菌数。如果规格为25格 ×16格的计数板，除了取其4个对角方位外，还需 再数中央的一个中格(即80个小方格)的酵母菌数