复旦大学：《生物化学》课程教学资源（实验讲稿）实验二 酶促反应动力学实验

实验二 酶促反应动力学实验

实 验 二 酶促反应动力学实验

前言 今酶促反应动力学:研究酶促反应速度及其影响因素的科学 令研究的理论和实践意义: 有助于阐明酶的结构与功能的关系 也可为酶作用机理的研究提供数据 帮助寻找最有利的反应条件,以最大限度地发挥酶催化反应的高效率 有助于了解酶在代谢中的作用或某些药物作用的机理等

前言  酶促反应动力学：研究酶促反应速度及其影响因素的科学  研究的理论和实践意义：  有助于阐明酶的结构与功能的关系  也可为酶作用机理的研究提供数据  帮助寻找最有利的反应条件，以最大限度地发挥酶催化反应的高效率  有助于了解酶在代谢中的作用或某些药物作用的机理等

实验目的 1.观察底物浓度对酶促反应速度的影响 2.观察抑制剂对酶促反应速度的影响 3.掌握用双倒数作图法测定碱性磷酸酶的Km值

实验目的 1. 观察底物浓度对酶促反应速度的影响 2. 观察抑制剂对酶促反应速度的影响 3. 掌握用双倒数作图法测定碱性磷酸酶的Km值

实验原理 酶促反应模型 底物 活性中心 酶 底物分子与酶的中心 催化反应,底物转 结合 发为产物

酶促反应模型 底物 酶 底物分子与酶的中心 结合 活性中心 催化反应，底物转 发为产物 实 验 原 理

酶促反应特点: 酶促反应的特性:高效性、高特异性、高不稳定性、可调 节性。 令反应体系的条件必须严格控制。 2、酶活性测定的基础是化学反应速度的比较,即酶催化的化 学反应速度与无酶或酶失活情况下化学反应速度的比较。 反应速度通常以测定单位时间内产物生成量或底物的减少量 来确定

1、酶促反应的特性：高效性、高特异性、高不稳定性、可调 节性。  反应体系的条件必须严格控制。 2、酶活性测定的基础是化学反应速度的比较，即酶催化的化 学反应速度与无酶或酶失活情况下化学反应速度的比较。  反应速度通常以测定单位时间内产物生成量或底物的减少量 来确定。 酶促反应特点：

3、酶催化反应的典型曲线是随着时间的延长,反应速度下 降,由起初的直线变为曲线。 测定酶活性的所有反应速率的比较都必须依赖该曲线的 线性部分,因此要测定最初反应速度,即底物浓度变化 在底物起始浓度的5%以内的速度

3、酶催化反应的典型曲线是随着时间的延长，反应速度下 降，由起初的直线变为曲线。 测定酶活性的所有反应速率的比较都必须依赖该曲线的 线性部分，因此要测定最初反应速度，即底物浓度变化 在底物起始浓度的5％以内的速度

酶促反应速度的影响因素 温度(最优温度) pH(最优pH 酶的浓度 底物浓度 抑制剂 激活剂

酶促反应速度的影响因素  温度(最优温度)  pH (最优pH)  酶的浓度  底物浓度  抑制剂  激活剂

实验对象:碱性磷酸酶(AKP) 碱性磷酸酶 磷酸苯二钠 苯酚十磷酸氢二钠 4氨基安替比林 碱性条件K3Fe(CN) 醌衍生物(红色)

实验对象：碱性磷酸酶（AKP） 磷酸苯二钠 碱性磷酸酶 苯酚＋磷酸氢二钠 4-氨基安替比林 ＋ K3Fe（CN）6 醌衍生物（红色） 碱性条件

、pH对酶促反应速度的影响 令碱性磷酸酶(AKP)的最适pH值是10 温度对酶促反应速度的影响 令碱性磷酸酶(AKP)的最适温度是37℃

一、pH对酶促反应速度的影响  碱性磷酸酶（AKP）的最适pH值是10。 二、温度对酶促反应速度的影响  碱性磷酸酶（AKP）的最适温度是37℃

、底物浓度对酶促反应速度的影响 碱性磷酸酶米氏常数的测定 米-曼氏( Michaelis- Menten) 方程: max V/2 V S max max Km+s S

三、底物浓度对酶促反应速度的影响 ——碱性磷酸酶米氏常数的测定 Ｖ Vmax[S] Km + [S] ＝ ── 米-曼氏（Michaelis-Menten） 方程： Vmax V [S] Km Vmax/2