复旦大学：《仪器分析 Instrumental Analysis》课程教学资源（讲义课件）高效液相色谱法 high performance liquid chromatography HPLC

第十八章高效液相色谱法 high performance liquid chromatography yuyu@shmu.edu.cn

1 第十八章 高效液相色谱法 high performance liquid chromatography yqyu@shmu.edu.cn

口以经典液相色谱法为基础,引入气相色谱的理论 与实验方法,发展而成的分离分析方法。 以高压泵输送液体流动相,采用高效固定相,实 现在线检测和仪器化。具有分离效能高、分析速 度快、应用范围广等的特点 HPLC高压泵进样器邮色谱柱检测器 Gc气路系统 数据处理器 和显示器

2  以经典液相色谱法为基础，引入气相色谱的理论 与实验方法，发展而成的分离分析方法。  以高压泵输送液体流动相，采用高效固定相，实 现在线检测和仪器化。具有分离效能高、分析速 度快、应用范围广等的特点。 高压泵 进样器 色谱柱 检测器 数据处理器 和显示器 气路系统 HPLC GC

与气相色谱法对比 口Gc快速、分离效率高、样品用量少。在约300万个有 机化合物中,可以直接用该法分析的占20%。 口HPLC快速、分离效率高、样品不受挥发性及热稳定性 的约束,分析对象广。 与经典液相色谱法的比较 口固定相颗粒细、规则均匀 口柱效高,分离效率高 口分析速度快 口检测灵敏度:UV10-9g,FLD1012g

3  GC 快速、分离效率高、样品用量少。在约300万个有 机化合物中，可以直接用该法分析的占20%。  HPLC 快速、分离效率高、样品不受挥发性及热稳定性 的约束，分析对象广。 与气相色谱法对比 与经典液相色谱法的比较  固定相颗粒细、规则均匀  柱效高，分离效率高  分析速度快  检测灵敏度：UV 10－9g，FLD 10－12g

第一节高效液相色谱法的主要类型 及固定相和流动相 、主要类型 口固定相聚集状态 LLC LSC 口分离机制 分配、吸附、离子交换、空间排阻、 ■■■■ 口化学键合相色谱法

4 第一节 高效液相色谱法的主要类型 及固定相 和流动相 一、主要类型 固定相聚集状态 LLC 分配、吸附、离子交换、空间排阻、…… 化学键合相色谱法 LSC 分离机制

HPLC的固定相 口对固定相的要求 口化学键合相 >将固定液的官能团键合在载体的表面构 成化学键合相 >以化学键合相为固定相的色谱法称为键 合相色谱法 >键合相色谱法是应用最广的色谱法

5 二、HPLC的固定相  对固定相的要求  化学键合相  将固定液的官能团键合在载体的表面构 成化学键合相  以化学键合相为固定相的色谱法称为键 合相色谱法  键合相色谱法是应用最广的色谱法

()化学键合相的种类和性质 1.种类 种类 键合基团 适用于 非极性C1H37、-CsH17、苯基反相 弱极性 0 正相/反相 极性 CN - NH 正相/反相

6 （一）化学键合相的种类和性质 种类 键合基团 适用于 非极性 -C18H37 、 -C8H17、苯基 反相 弱极性 O 正相/反相 极性 CN NH2 正相/反相 1. 种类

2.键合相的性质和特点 (1)键合反应 R R = Si-OH iCI--Si Ci8Hzx-HCI =Si-( -- C18h37 R (2)含碳量和覆盖度键合相表面的键合量 (3)键合相的特点不流失、稳定,重现性好, 柱效高,载样量大 (4)注意点pH适用范围

7 2. 键合相的性质和特点 C18H37 C18H37 －HCl 不流失、稳定，重现性好， 柱效高，载样量大 键合相表面的键合量 （1） 键合反应 （2）含碳量和覆盖度 （3） 键合相的特点 （4）注意点 pH适用范围

(二)其他种类固定相 键合型离子交换剂 在硅胶为载体,用化学方法键合上各种离子交换基团 广泛用于各种离子(无机离子)分析测定 手性固定相 由各种具手性的物质组成固定相 选择分析、分离对映体的最重要手段 亲和色谱固定相 由载体十与之键合的配基组成 利用亲合反应的专属性,该法已成为生化药物纯化、 分析的重要手段

（二）其他种类固定相  键合型离子交换剂  手性固定相  亲和色谱固定相 8 在硅胶为载体，用化学方法键合上各种离子交换基团 广泛用于各种离子（无机离子）分析测定 由各种具手性的物质组成固定相 选择分析、分离对映体的最重要手段 由载体+与之键合的配基组成 利用亲合反应的专属性，该法已成为生化药物纯化、 分析的重要手段

、HPLC的流动相 口对流动相的基本要求 不与固定相发生化学反应。 对样品有适宜的溶解度。有合适的k值。 溶剂应与检测器相匹配, 溶剂的截止波长<样品的检测波长 纯度高,粘度小

9 三、HPLC的流动相  对流动相的基本要求 不与固定相发生化学反应。 对样品有适宜的溶解度。有合适的k值。 溶剂应与检测器相匹配， 溶剂的截止波长<样品的检测波长 纯度高，粘度小

()流动相对分离的影响 分离度R与门、a、k2的关系 √n R 4 k t n-决定于色谱柱(固定相)性能 口α、k受溶剂系统(流动相)影响

10 （一）流动相对分离的影响 分离度R与n、、k2的关系 n-决定于色谱柱（固定相）性能 、k-受溶剂系统（流动相）影响 ) 1 )( 1 ( 4 2 2    k n k R  