复旦大学：《生物化学》课程教学资源（实验讲稿）实验一 蛋白质的吸光分析测定

Dept. Biochem Mol Biol 蛋白质的吸光分析测定 上医生化

蛋白质的吸光分析测定

Dept. Biochem Mol Biol 本次实验目的 掌握蛋白质浓度测定的三种方法的原理、实验步骤 了解改良lowy法、 Coomassie亮蓝法、紫外分光光度法测 定蛋白浓度的区别、优缺点以及适用范围 上医生化

• 掌握蛋白质浓度测定的三种方法的原理、实验步骤 • 了解改良lowry法、Coomassie亮蓝法、紫外分光光度法测 定蛋白浓度的区别、优缺点以及适用范围。 本次实验目的

Dept. Biochem Mol Biol 蛋白质是生物体的重要组成成分,也是生命活 动的主要物质基础。 蛋白质含量测定是各基础和临床学科的基本实 验手段。 ≯根据蛋白质的物理、化学或者生物学特性可以 测定其含量。 目前常用的是比色法和紫外分光光度法。 上医生化

 蛋白质是生物体的重要组成成分，也是生命活 动的主要物质基础。  蛋白质含量测定是各基础和临床学科的基本实 验手段。  根据蛋白质的物理、化学或者生物学特性可以 测定其含量。  目前常用的是比色法和紫外分光光度法

Dept. Biochem Mol Biol 本次实验内容 利用分光光度计进行蛋白质定量测定 1.改良 Lowry比色法( Hartree法) 2.考马斯( Coomassie)亮蓝结合法 3.紫外分光光度法 上医生化

利用分光光度计进行蛋白质定量测定 1.改良Lowry比色法（Hartree法） 2.考马斯（Coomassie）亮蓝结合法 3.紫外分光光度法 本次实验内容

Dept. Biochem Mol Biol 原理和仪器 吸光分析法的原理 1.有色物质对可见光有选择性吸收作用;一些无 色溶液对可见光无吸收作用,但其所含物质可 以吸收特定波长的紫外线或红外线 2.不同物质由于分子结构不同,对不同波长光的 吸收能力也不同。因此每种物质都具有其特征 性的吸收光谱。 3.在一定条件下,物质对光的吸收程度与该物质 的浓度成正比。 上医生化

1.有色物质对可见光有选择性吸收作用；一些无 色溶液对可见光无吸收作用，但其所含物质可 以吸收特定波长的紫外线或红外线。 2.不同物质由于分子结构不同，对不同波长光的 吸收能力也不同。因此每种物质都具有其特征 性的吸收光谱。 3.在一定条件下，物质对光的吸收程度与该物质 的浓度成正比。 吸光分析法的原理 原理和仪器

Dept. Biochem Mol Biol 如何定性? 利用吸收光谱鉴定化合物 利用分光光度计绘制吸收光谱曲线 用各种不同的单色光分别通过某一溶液,测定此溶液 对每一种单色光的吸收度,以波长为横坐标,以吸光度为 纵坐标绘制吸光度-波长曲线,即吸收光谱曲线。 每种物质有其特征性的吸收光谱 上医生化

— 利用吸收光谱鉴定化合物 利用分光光度计绘制吸收光谱曲线 用各种不同的单色光分别通过某一溶液，测定此溶液 对每一种单色光的吸收度，以波长为横坐标，以吸光度为 纵坐标绘制吸光度-波长曲线，即吸收光谱曲线。 如何定性？ 每种物质有其特征性的吸收光谱

Dept. Biochem Mol Biol 3o5 670 0.01 400 500 600 Wavelength 胡萝卜素蛋白复合物室温吸收光谱 上医生化

胡萝卜素蛋白复合物室温吸收光谱

Dept. Biochem Mol Biol 如何定量? 一 Lambert-Beer定律 1.朗伯( Lambert)定律 束单色光通过一光吸收介质时,其光强度随吸收光 介质的厚度增加呈指数减少。 LgIo/I=KL 入射光强度;I:透射光强度;L:介质厚度 K:吸光系数 上医生化

1. 朗伯（Lambert）定律 一束单色光通过一光吸收介质时，其光强度随吸收光 介质的厚度增加呈指数减少。 LgI0/I=KL I0 :入射光强度； I :透射光强度；L ：介质厚度 K：吸光系数 — Lambert - Beer定律 如何定量？

Dept. Biochem Mol Biol 2.比尔(Beer)定律 束单色光通过一光吸收介质时,其光强度随吸收光 介质的浓度的增加呈指数减少。 LgIo/I=KC 入射光强度;I:透射光强度;C:介质浓度 K:吸光系数 上医生化

2．比尔（Beer）定律 一束单色光通过一光吸收介质时，其光强度随吸收光 介质的浓度的增加呈指数减少。 LgI0/I=KC I0 :入射光强度； I :透射光强度；C ：介质浓度 K：吸光系数

Dept. Biochem Mol Biol 3. Lambert-beer'slaw的合并 束单色光通过某溶液时,光波被溶液吸收一部分,吸 收多少与溶液中溶质的浓度和溶液厚度成正比 A=-Igt=-Igl/I=KcL A:吸光度;C:溶液浓度;L:液层厚度;T:透光度 K:即吸光系数,是指当溶液浓度为1mol/L,光程(溶液厚 度)为1cm时的吸光度。 上医生化

3.Lambert-beer’s law的合并 一束单色光通过某溶液时，光波被溶液吸收一部分，吸 收多少与溶液中溶质的浓度和溶液厚度成正比。 A= -lgT= -lg I/ I 0 =KCL A：吸光度； C：溶液浓度； L：液层厚度；T：透光度 K：即吸光系数，是指当溶液浓度为1mol/L,光程(溶液厚 度)为1cm时的吸光度