《动物遗传学》课程教学资源（实验指导）细胞遗传学实验四 果蝇唾腺染色体标本制备和观察

*实验四果蝇睡腺染色体标本制备和观察（注意：该实验由参加果蝇兴趣小组的同学完成）一、实验目的和要求1.了解3龄幼虫的饲养特点2.熟练取出黑腹果蝇的睡腺3.掌握压片法制备果蝇睡腺染色体4．要求参加实验的学生认真预习实验指导，认真阅读参考资料。事先了解实验原理、材料和方法以及实验步骤。二、实验分组一个班约30人不分组人人都做该实验。三、实验材料、器具和试剂材料：黑腹果蝇三龄幼虫，选择迟缓、肥大，爬上管壁的3龄幼虫最佳。器材：显微镜、解剖镜、解剖针、载玻片、盖玻片、试剂：生理盐水（0.7%NaCI）、5%的醋酸洋红（或石炭酸）、滤纸片。松香石蜡：用等量的松香和52℃石蜡放在蒸发血内用小火煮（大火会烧起来），待两者充分混合成浓的米黄色，取下来冷却凝固。使用时，用烧热铁丝的前端沾有少量的溶解物，封在载玻片周围。四、方法步骤1.三龄幼虫的饲养专供果蝇睡腺染色体压片的幼虫必须十分肥大，发育良好的睡液腺在解剖镜下面可以清楚地看到为数不多的较大的腺体细胞，取其染色后压片，可望获得理想的睡腺染色体。2.从培养基中挑选一只肥大的三龄幼虫。3.将幼虫放在载玻片上，加上一小滴生理盐水，置于解部镜下。4，两手各执一支解部针，二支固定在幼虫于部（身体末端1/3处），另一支固定在头部（口器的后部），用力向前拉，把头部自身体拉开，睡腺即随之而出。睡腺为一对透明状的长圆物体(图3-4)。Pmasd图3-4果蝇睡腺a肛门，h后肠，g盲囊，mi中肠，i睡腺原基，mh大腺沟，o食道，ph咽头，pr前胃

*实验四 果蝇唾腺染色体标本制备和观察 （注意：该实验由参加果蝇兴趣小组的同学完成） 一、 实验目的和要求 1．了解 3 龄幼虫的饲养特点 2．熟练取出黒腹果蝇的唾腺 3．掌握压片法制备果蝇唾腺染色体 4．要求参加实验的学生认真预习实验指导，认真阅读参考资料。事先了解实验原理、 材料和方法以及实验步骤。 二、实验分组 一个班约 30 人不分组人人都做该实验。 三、实验材料、器具和试剂 材料：黑腹果蝇三龄幼虫，选择迟缓、肥大，爬上管壁的 3 龄幼虫最佳。 器材：显微镜、解剖镜、解剖针、载玻片、盖玻片、 试剂：生理盐水（0.7%NaCl）、5%的醋酸洋红（或石炭酸）、滤纸片。 松香石蜡：用等量的松香和 52℃石蜡放在蒸发皿内用小火煮（大火会烧起来），待两者 充分混合成浓的米黄色，取下来冷却凝固。使用时，用烧热铁丝的前端沾有少量的溶解物， 封在载玻片周围。 四、方法步骤 1．三龄幼虫的饲养 专供果蝇唾腺染色体压片的幼虫必须十分肥大，发育良好的唾液 腺在解剖镜下面可以清楚地看到为数不多的较大的腺体细胞，取其染色后压片，可望获得理 想的唾腺染色体。 2．从培养基中挑选一只肥大的三龄幼虫。 3．将幼虫放在载玻片上，加上一小滴生理盐水，置于解剖镜下。 4．两手各执一支解剖针，一支固定在幼虫躯干部（身体末端 1/3 处），另一支固定在头 部（口器的后部），用力向前拉，把头部自身体拉开，唾腺即随之而出。唾腺为一对透明状 的长圆物体(图 3-4)。 图 3-4 果蝇唾腺 a 肛门，h 后肠，g 盲囊，mi 中肠，i 唾腺原基，mh 大腺沟，o 食道，ph 咽头，pr 前胃

sd唾腺分泌管，sq唾腺，mt马氏管5.仔细将睡腺与其他组织分离（如脂肪组织和拉断的消化道部分）待分离后用滤纸擦去其他组织。（注意勿使睡腺干燥）。6.滴两滴醋酸洋红染液，染色20~30分钟。7.用滤纸吸去多余的染液，重新加入一小滴染液。加上盖片。8.用大拇指在盖玻片上用力压，以使睡腺细胞中的染色体破核而出。9.置显微镜下观察。10.好的片子用松香石蜡封片。另一种封片是用加拿大胶，即将上述压片放在95%的酒精蒸汽中固定24h后，再放在95%的酒精中轻轻取下盖片，稍擦净后滴一滴封片用的加拿大胶，盖上一片干净的盖片即制成永久片。11，果蝇睡腺染色体标本观察先在低倍镜观察片子，找到好的染色体图象后，放到视野中心，再用高倍镜观察。黑腹果蝇的睡腺染色体是2n=2×4=8。但因短小的第4染色体和X染色体的着丝粒在端部，所以染色体的一端在染色中心上，看上去，各自只形成一条线状和点状的染色体。只有第二和第三染色体的着丝粒在中央，它们从染色中心以V字形向外伸出（图3-5）。有JTA生iRs古学果色学身色样在护Eoan图3-5果蝇睡腺染色体模式图五、回答下面问题1.何谓果蝇的三龄幼虫？2.你是否顺利取到果蝇睡腺？有什么体会？画出果蝇睡腺示意图。3.为什么说果蝇睡腺染色体是多线染色体？4.为什么说果蝇睡腺染色体是研究染色体畸变最好的实验材料？附：参考资料：果蝇睡腺染色体的特殊性上世纪初，D.Kostoff用压片法首先在D.melanogaster果蝇幼虫的睡腺细胞核中发现了特别巨大的染色体睡腺染色体（salivaryglandchromosomes），这种染色体宽约5微米，长约400微米，相当于普通染色体的100～150倍，由于它具有许多重要特点而成为细胞遗传学、发生遗传学、进化遗传学和分子遗传学研究不可多得的好材料。睡腺染色体经过多次复制而并不分开，大约有1000～4000根染色体丝的拷贝，所以又

sd 唾腺分泌管，sq 唾腺，mt 马氏管 5．仔细将唾腺与其他组织分离（如脂肪组织和拉断的消化道部分）待分离后用滤纸擦 去其他组织。（注意勿使唾腺干燥）。 6．滴两滴醋酸洋红染液，染色 20～30 分钟。 7．用滤纸吸去多余的染液，重新加入一小滴染液。加上盖片。 8．用大拇指在盖玻片上用力压，以使唾腺细胞中的染色体破核而出。 9．置显微镜下观察。 10．好的片子用松香石蜡封片。另一种封片是用加拿大胶，即将上述压片放在 95%的 酒精蒸汽中固定 24h 后，再放在 95%的酒精中轻轻取下盖片，稍擦净后滴一滴封片用的加 拿大胶，盖上一片干净的盖片即制成永久片。 11．果蝇唾腺染色体标本观察 先在低倍镜观察片子，找到好的染色体图象后，放到视 野中心，再用高倍镜观察。 黑腹果蝇的唾腺染色体是 2n=2×4=8。但因短小的第 4 染色体和 X 染色体的着丝粒在端 部，所以染色体的一端在染色中心上，看上去，各自只形成一条线状和点状的染色体。只有 第二和第三染色体的着丝粒在中央，它们从染色中心以 V 字形向外伸出（图 3-5）。 图 3-5 果蝇唾腺染色体模式图 五、回答下面问题 1．何谓果蝇的三龄幼虫？ 2．你是否顺利取到果蝇唾腺？有什么体会？画出果蝇唾腺示意图。 3．为什么说果蝇唾腺染色体是多线染色体？ 4．为什么说果蝇唾腺染色体是研究染色体畸变最好的实验材料？ 附：参考资料：果蝇唾腺染色体的特殊性 上世纪初，D.Kostoff 用压片法首先在 D.melanogaster 果蝇幼虫的唾腺细胞核中发现了 特别巨大的染色体——唾腺染色体（salivary gland chromosomes），这种染色体宽约 5 微米， 长约 400 微米，相当于普通染色体的 100～150 倍，由于它具有许多重要特点而成为细胞遗 传学、发生遗传学、进化遗传学和分子遗传学研究不可多得的好材料。 唾腺染色体经过多次复制而并不分开，大约有 1000～4000 根染色体丝的拷贝，所以又

称为多线染色体。多线染色体经过染色后，出现深浅不同，密疏各别的横纹，这些横纹的数目和位置往往是恒定的，代表着果蝇等昆虫的种的特征。如染色体有缺失、重复、倒位、易位等，很容易在睡腺染色体上识别出来。双翅目昆虫的整个消化道细胞（从睡腺直到直肠）发育到一定阶段之后就不再进行有丝分裂，停止在间期。但随着幼虫整体器官以及这些细胞本身体积的增大，细胞核的染色体，尤其是睡腺染色体仍不断地进行自我复制而并不分开。据估计，大约有1000一4000条染色丝的拷贝形成一束巨大染色体，因此，睡腺染色体又称为多线染色体。由于睡腺细胞在果蝇的幼虫时期永远处于分裂的间期状态，所以每一条核蛋白丝都处于伸展状态，因而它不同手其他细胞分裂中期时的高度螺旋化的染色体

称为多线染色体。多线染色体经过染色后，出现深浅不同，密疏各别的横纹，这些横纹的数 目和位置往往是恒定的，代表着果蝇等昆虫的种的特征。如染色体有缺失、重复、倒位、易 位等，很容易在唾腺染色体上识别出来。 双翅目昆虫的整个消化道细胞（从唾腺直到直肠）发育到一定阶段之后就不再进行有丝 分裂，停止在间期。但随着幼虫整体器官以及这些细胞本身体积的增大，细胞核的染色体， 尤其是唾腺染色体仍不断地进行自我复制而并不分开。据估计，大约有 1000－4000 条染色 丝的拷贝形成一束巨大染色体，因此，唾腺染色体又称为多线染色体。 由于唾腺细胞在果蝇的幼虫时期永远处于分裂的间期状态，所以每一条核蛋白丝都处于伸展 状态，因而它不同于其他细胞分裂中期时的高度螺旋化的染色体