新乡医学院：《卫生化学》课程教学资源（课件讲稿，打印版）实验二 荧光分光光度法测定尿中核黄素

荧光分光光度法测定尿中核黄素 授课教师 田宏

荧光分光光度法测定尿中核黄素 实验目的 1.掌握分光光度法测定核黄素的原理和方法 2.了解荧光分光光度计的基本原理、结构和操作

荧光分光光度法测定尿中核黄素 实验原理 核黄素溶液在蓝光照射下，发出绿色荧光。在pH=6~7 的溶液中荧光强度最大。在稀溶液中，F-2.303ΦLεbc,实 验条件一定时，F=Kc OH 桔黄色 易溶于水 中性/酸性溶液中稳定 光照易分解

荧光分光光度法测定尿中核黄素 仪器与试剂 仪器：荧光分光光度计；1cm石英比色皿 试剂：核黄素标液 0.15%硫酸 低亚硫酸钠 待测液

荧光分光光度法测定尿中核黄素 操作步骤 1.激发光谱和荧光发射光谱的绘制 核黄素标液，λex=510nm,在360~480nm,测激发光谱 在λex下，在450~600nm,测荧光发射光谱 2.标准溶液及样品的荧光测定 λex、λex下测定 1.0ml尿样+19.0ml0.1%H,S0,据匀Fx +5~10mgNa2S204摇匀F0 10尿样t15n核黄素标液+175ml0.1%H,s50,为f。 +5~10mgNa2S204 Fo

荧光分光光度法测定尿中核黄素 注意事项 1.注意避光 2.小心使用比色皿