新乡医学院：《卫生化学》课程教学资源（教案讲义，打印版）实验一 邻菲罗啉分光光度法测定水中微量铁

新乡医学院教案首页 课程名称 《卫生化学》（实验） 授课题目 邻菲罗啉分光光度法测定水中微量铁 授课对象 2014级卫检专业本科生 1.水中铁的测定意义 2分钟 2.分光光度法测定微量铁的原理及优化方法 20分钟 时间分配 3.标准曲线法测定水中铁含量 8分钟 4.分光光度计的使用方法 5分钟 5.实验操作 160分钟 总结 5分钟 L.掌握分光光度法最佳实验条件选择方法。 课时目标 2.熟悉分光光度法的基本原理及仪器操作方法。 3。了解测定微量铁的方法 授课重点 分光光度法最佳实验条件选择方法及标准曲线法测未知样品 授课难点 分光光度法测定微量铁的原理。 分光光度法最佳实验条件选择方法。 授课形式 小班实验课教学 授课方法 讲授结合示教、练习 参考文献 《卫生化学》 思考题 式剂加入顺序对显色结果有何影响？何帮助？

教研室主任及 教研室主任（签字） 课程负责人（签字） 课程负责人签 学 年月日 年月日 教素续页 讲义内容 教学组织与 教学安排

实验目的： 让学生爱罐分光光 度法测铁的原理及 1.掌握分光光度法最佳实验条件选择方法。 方候。 2.熟悉分光光度法的基本原理及仪器操作方法。 3.了解测定微量铁的方法。 邻二氮菲（又称邻菲罗啉）是测定微量铁的较好试剂，在pH=2~ 9的条件下，二价铁离子与试剂生成极稳定的橙红色配合物。配合 提间生，和深臀 物的lgK。=21.3,摩尔吸光系数6o=11000Lmor'cm。 生的印最，国瓶理 论保所学知识。 在显色前，用盐酸羟胺把三价铁离子还原为二价铁离子。 4Fe++2NH2OH-4Fe2*N2O 4H+H2O 测定时，控制溶液pH=3较为适宜，酸度高时，反应进行较慢 酸度太低，则二价铁离子水解，影响显色。 显色反应通常会受到多种因素的影响，如显色剂加入量、溶液 的酸度、反应温度、显色时间、测量波长等。 一、吸收曲线的绘制 移取0.8ml标准铁应用液于25ml容量瓶中。加入0.5ml盐酸羟 胺溶液，混匀后放置2分钟。加1.0ml邻菲啰啉溶液和2.5l乙酸 西示老团，剂保学 钠溶液，加水稀释至刻度，摇匀，放置10分钟，另取一个容量瓶加 生理解。 0.8ml去离子水代替铁标准溶液，其余操作同上，配成试剂空白为 参比，在不同波长(X)下测量相应的吸光度(A)(从440nm到560nm 间隔10nm测量一次吸光度，其中在500-520nm之间，间隔5nm测 量一次)。然后以波长为横坐标，吸光度为纵坐标绘A~入曲线，确 定适宜的工作波长。在A~入曲线中最大吸收值对应的波长为该方 法的最佳测定波长。 二、标准曲线的绘制 取6个容量瓶，分别加入0.00、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00ml 标准铁溶液，各加入0.5m1盐酸羟胺溶液，混匀后放置2分钟。各 加1.0m1邻菲啰啉溶液和2.5ml乙酸钠溶液，加水稀释至刻度，混

匀后，放置10分钟。以试剂空白为参比，在选定的测定波长下测量命制称集由线，▣ 履比水度种。 各溶液的吸光度。以铁的浓度（©）为横坐标、相应的吸光度值(A) 为纵坐标，绘制铁标准溶液标准系列的标准曲线。 三、水中铁含量的测定 取一定体积的水样于25m1容量瓶中，按步骤二的条件操作，在实际发用 相同条件下测定吸光度值，从标准曲线上查出相应的铁含量。通过 计算求得水样中铁含量。 注意事项： 1)注意试剂加入顺序： 2)小心使用比色皿

教聚来页 12 分光光度法基本原理 法最佳实验条件选择 3. 4.实验中出现的问题 小结 教学后记